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新手求助定量PCR具体实验方法，谢谢各位指点！ 已有1人参与
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求各位大神指点！ 本人现在准备做荧光定量PCR，看了不少资料，但还是不太明白具体的实验步骤该怎么做。 目的是测定不同菌株（相同种类）之间数个基因的表达量差异，准备用相对定量的方法，内参基因选的是16sRNA。 细菌RNA已经提了，然后用的takala的盒子转录的DNA。接下来的实验就不明白具体怎么做了，仪器是ABI的Step ONE。 时间很紧，在下很菜，请各位不吝赐教！ |
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【答案】应助回帖
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炒饭达人(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-28 22:01:26
炒饭达人: 金币+17, ★★★★★最佳答案 2014-08-30 00:48:06
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1,内参试过没？能用吗？ 2，你的基因引物设计了吗？200bp左右，有没有普通pcr验证过 3，反转录的时候rna定量了吗？ 如果以上都完成了，那你就可以像做普通pcr那样做了，不同的是 1，要用专门的酶，就是有SYBR的… 2.做阴性对照，和三个复孔 3,小心加样，减少加样误差，复孔Ct不得大于0.5 差不多就这些吧 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
2楼2014-08-28 00:48:16
3楼2014-08-28 09:29:58
4楼2014-08-28 11:11:09
5楼2014-10-13 13:13:25
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