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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

[求助] PCR 点样后仅存在点样孔中 已有8人参与

PCR之后进行点样,扫胶发现样品全在样品孔中,对点样孔进行胶回收后再次点样,发现胶孔依旧发亮,应该能排除蛋白污染;也通过加sds对样品处理,依旧没有反应,我做的是串联PCR,不知有人能否给出合理答案。救命啊(酶试了高保真、EXtaq、LA taq的)
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
marker跑了没?放图出来
2楼2014-08-25 23:01:45
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上个图。有Marker一起电泳么?
自然如此美丽!
3楼2014-08-26 12:46:41
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Crocodile-YK at 2014-08-26 12:46:41
上个图。有Marker一起电泳么?

MARKER  能明显看出条带,说明胶也没问题
PCR 点样后仅存在点样孔中
副本.jpg

4楼2014-08-27 09:42:00
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bwangel at 2014-08-25 23:01:45
marker跑了没?放图出来

图上的marker 是2000的,说明胶也没问题
5楼2014-08-27 09:42:48
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhuimengjy at 2014-08-27 09:42:00
MARKER  能明显看出条带,说明胶也没问题

副本.jpg
...

胶的浓度可能不适合你的样品。浓度太高了,PCR产物根本跑不动。或者,你尝试上少一点样,还是这样的话,就调整胶或者换电泳液。先试试。
自然如此美丽!
6楼2014-08-27 12:54:07
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guxiaotong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我之前在做PCR时也遇到这种情况,很有可能是你的引物特异性不好而扩增出来的条带,你需要的目的条带是多少?
7楼2014-08-28 20:54:44
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by guxiaotong at 2014-08-28 20:54:44
我之前在做PCR时也遇到这种情况,很有可能是你的引物特异性不好而扩增出来的条带,你需要的目的条带是多少?

1200bp的
8楼2014-08-29 11:16:52
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Crocodile-YK at 2014-08-27 12:54:07
胶的浓度可能不适合你的样品。浓度太高了,PCR产物根本跑不动。或者,你尝试上少一点样,还是这样的话,就调整胶或者换电泳液。先试试。...

我也试低浓度的胶了。效果一样啊
9楼2014-08-29 11:17:59
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zhuimengjy at 2014-08-29 11:17:59
我也试低浓度的胶了。效果一样啊...

焕电泳液了吗?没理由呀。
自然如此美丽!
10楼2014-08-29 11:34:17
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