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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR 点样后仅存在点样孔中
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

[求助] PCR 点样后仅存在点样孔中 已有8人参与

PCR之后进行点样，扫胶发现样品全在样品孔中，对点样孔进行胶回收后再次点样，发现胶孔依旧发亮，应该能排除蛋白污染；也通过加sds对样品处理，依旧没有反应，我做的是串联PCR，不知有人能否给出合理答案。救命啊（酶试了高保真、EXtaq、LA taq的）
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1楼 2014-08-25 16:57:31
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker跑了没？放图出来
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2楼2014-08-25 23:01:45
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上个图。有Marker一起电泳么？
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自然如此美丽！
3楼2014-08-26 12:46:41
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Crocodile-YK at 2014-08-26 12:46:41
上个图。有Marker一起电泳么？

MARKER  能明显看出条带，说明胶也没问题
PCR 点样后仅存在点样孔中
副本.jpg
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4楼2014-08-27 09:42:00
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bwangel at 2014-08-25 23:01:45
marker跑了没？放图出来

图上的marker 是2000的，说明胶也没问题
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5楼2014-08-27 09:42:48
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhuimengjy at 2014-08-27 09:42:00
MARKER  能明显看出条带，说明胶也没问题

副本.jpg
...

胶的浓度可能不适合你的样品。浓度太高了，PCR产物根本跑不动。或者，你尝试上少一点样，还是这样的话，就调整胶或者换电泳液。先试试。
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自然如此美丽！
6楼2014-08-27 12:54:07
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guxiaotong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我之前在做PCR时也遇到这种情况，很有可能是你的引物特异性不好而扩增出来的条带，你需要的目的条带是多少？
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7楼2014-08-28 20:54:44
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by guxiaotong at 2014-08-28 20:54:44
我之前在做PCR时也遇到这种情况，很有可能是你的引物特异性不好而扩增出来的条带，你需要的目的条带是多少？

1200bp的
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8楼2014-08-29 11:16:52
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Crocodile-YK at 2014-08-27 12:54:07
胶的浓度可能不适合你的样品。浓度太高了，PCR产物根本跑不动。或者，你尝试上少一点样，还是这样的话，就调整胶或者换电泳液。先试试。...

我也试低浓度的胶了。效果一样啊
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9楼2014-08-29 11:17:59
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhuimengjy at 2014-08-29 11:17:59
我也试低浓度的胶了。效果一样啊...

焕电泳液了吗？没理由呀。
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自然如此美丽！
10楼2014-08-29 11:34:17
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