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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR 点样后仅存在点样孔中
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
zhuimengjy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:43:16
制胶、跑胶的电泳液都用1X的。看看是不是加母液进去了？
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11楼2014-08-29 15:37:06
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安简莫

金虫 (职业作家)
以前也遇到过类似问题，什么方法都试过了，就是在孔里面不出来，估计是引物特异性问题吧！奇了怪了

[ 发自小木虫客户端 ]
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到达不了的地方，永远是一种诱惑~
12楼2014-08-29 16:26:15
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有marker，胶，带，电解液等都没问题，貌似还有一条带，说明PCR可能也没问题，我的判断是蛋白吧，模板的问题吧
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13楼2014-08-30 14:06:00
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爬爬大蜗牛

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

把胶浓度做高点，点个10000bp的marker，重新跑
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14楼2014-08-30 16:21:48
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百褶裙de夏天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

模板蛋白质多，把核酸截留在点样孔中跑不出来，你减少模板量试试。
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15楼2014-09-02 10:55:18
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堂前燕子

新虫 (初入文坛)
楼主，知道为什么了吗？遇到一样的情况，求交流
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16楼2014-10-13 15:35:36
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 堂前燕子 at 2014-10-13 15:35:36
楼主，知道为什么了吗？遇到一样的情况，求交流

至做出来一次，之后还是那种情况了，有可能是样降解了
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17楼2014-10-14 13:10:57
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2007090351

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有两种可能性
1.你的引物中有一条不好，而另外一条引物就把整个cDNA都扩增出来了。
2.你的胶没有凉透你就拔梳子了，在胶孔中就会残留有碎胶，堵住了电泳通路，条带无法通过或通过很困难。
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18楼2014-10-14 16:44:36
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

胶的浓度再大也可以跑出来的，所以与胶的浓度关系不大，再者与分子量大小也无关，即使是基因组DNA也可以跑出来的，而marker跑出来了，这样就只剩下几个解释了。
1、电泳缓冲液配方有问题或者浓度有问题；2、loading buffer 可能有问题；3、没有扩增出条带，加样孔中残留的只是蛋白


解决办法：逐一排查
1、用别的DNA样品跑一次电泳，排查电泳缓冲液问题
2、PCR产物直接用苯酚抽提一次再酒精沉淀，之后再跑电泳

就事论事，提供一点参考意见，你可以试试
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没有做不到，只有想不到！
19楼2014-10-14 20:30:57
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