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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


zhuimengjy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-29 20:43:16
制胶、跑胶的电泳液都用1X的。看看是不是加母液进去了?
11楼2014-08-29 15:37:06
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安简莫

金虫 (职业作家)

以前也遇到过类似问题,什么方法都试过了,就是在孔里面不出来,估计是引物特异性问题吧!奇了怪了

[ 发自小木虫客户端 ]
到达不了的地方,永远是一种诱惑~
12楼2014-08-29 16:26:15
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有marker,胶,带,电解液等都没问题,貌似还有一条带,说明PCR可能也没问题,我的判断是蛋白吧,模板的问题吧
13楼2014-08-30 14:06:00
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爬爬大蜗牛

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

把胶浓度做高点,点个10000bp的marker,重新跑
14楼2014-08-30 16:21:48
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百褶裙de夏天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

模板蛋白质多,把核酸截留在点样孔中跑不出来,你减少模板量试试。
15楼2014-09-02 10:55:18
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堂前燕子

新虫 (初入文坛)

楼主,知道为什么了吗?遇到一样的情况,求交流
16楼2014-10-13 15:35:36
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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 堂前燕子 at 2014-10-13 15:35:36
楼主,知道为什么了吗?遇到一样的情况,求交流

至做出来一次,之后还是那种情况了,有可能是样降解了
17楼2014-10-14 13:10:57
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2007090351

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有两种可能性
1.你的引物中有一条不好,而另外一条引物就把整个cDNA都扩增出来了。
2.你的胶没有凉透你就拔梳子了,在胶孔中就会残留有碎胶,堵住了电泳通路,条带无法通过或通过很困难。
18楼2014-10-14 16:44:36
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

胶的浓度再大也可以跑出来的,所以与胶的浓度关系不大,再者与分子量大小也无关,即使是基因组DNA也可以跑出来的,而marker跑出来了,这样就只剩下几个解释了。
1、电泳缓冲液配方有问题或者浓度有问题;2、loading buffer 可能有问题;3、没有扩增出条带,加样孔中残留的只是蛋白


解决办法:逐一排查
1、用别的DNA样品跑一次电泳,排查电泳缓冲液问题
2、PCR产物直接用苯酚抽提一次再酒精沉淀,之后再跑电泳

就事论事,提供一点参考意见,你可以试试
没有做不到,只有想不到!
19楼2014-10-14 20:30:57
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