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zhuimengjy

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 486
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红花: 2
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虫号: 2353812
注册: 2013-03-17
专业: 微生物学

[求助] PCR 点样后仅存在点样孔中已有8人参与

PCR之后进行点样，扫胶发现样品全在样品孔中，对点样孔进行胶回收后再次点样，发现胶孔依旧发亮，应该能排除蛋白污染；也通过加sds对样品处理，依旧没有反应，我做的是串联PCR，不知有人能否给出合理答案。救命啊（酶试了高保真、EXtaq、LA taq的）

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1楼 2014-08-25 16:57:31

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

MolEPI: 2
应助: 124 (高中生)
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虫号: 1222296
注册: 2011-03-05
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

胶的浓度再大也可以跑出来的，所以与胶的浓度关系不大，再者与分子量大小也无关，即使是基因组DNA也可以跑出来的，而marker跑出来了，这样就只剩下几个解释了。
1、电泳缓冲液配方有问题或者浓度有问题；2、loading buffer 可能有问题；3、没有扩增出条带，加样孔中残留的只是蛋白

解决办法：逐一排查
1、用别的DNA样品跑一次电泳，排查电泳缓冲液问题
2、PCR产物直接用苯酚抽提一次再酒精沉淀，之后再跑电泳

就事论事，提供一点参考意见，你可以试试