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chang坤

金虫 (正式写手)

[求助] 提蛋白试剂的制备方法 已有1人参与

在提取菌体蛋白的方法中,0.7M蔗糖,0.5M Tris-HCl (pH=7),30mM HCl,50mM EDTA(pH=8),0.1M KCl,40mM DTT定容到25mL如何配置?
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为了理想拼了!
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chang坤: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-08-17 11:16:02
30mM HCl,50mM EDTA(pH=8) 这个是啥?
我用的是这个
7M尿素
2M硫脲
0.5%CHAPs
0.05M Tris-Hcl
效果蛮好的,不妨试试。tris HCL也可以适当提高,根据自己的蛋白浓度,浓度高就多加点。样品可以用来做WB,共沉淀,蛋白质组。
2楼2014-08-16 22:29:47
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chang坤

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-16 22:29:47
30mM HCl,50mM EDTA(pH=8) 这个是啥?
我用的是这个
7M尿素
2M硫脲
0.5%CHAPs
0.05M Tris-Hcl
效果蛮好的,不妨试试。tris HCL也可以适当提高,根据自己的蛋白浓度,浓度高就多加点。样品可以用来做WB,共沉淀 ...

亲,这个要定容到多少mL? 用超声还是用液氮提取蛋白,有没有参考文献?
为了理想拼了!
3楼2014-08-17 11:18:47
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chang坤 at 2014-08-17 11:18:47
亲,这个要定容到多少mL? 用超声还是用液氮提取蛋白,有没有参考文献?...

100ml,文献很多的,你随便搜一篇蛋白质组学文章都有的。成分大差不差。做做WB蛮好的,如果是纯化蛋白的话会麻烦点,建议不用。因为会把蛋白亚基分离,所以蛋白溶解度会提高很多,但是不会影响蛋白活性和结构,因为分离是可逆的。
4楼2014-08-17 14:59:35
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:29:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-17 14:59:35
100ml,文献很多的,你随便搜一篇蛋白质组学文章都有的。成分大差不差。做做WB蛮好的,如果是纯化蛋白的话会麻烦点,建议不用。因为会把蛋白亚基分离,所以蛋白溶解度会提高很多,但是不会影响蛋白活性和结构,因为 ...

对了。制作的时候最好稍微加加热,到个37度差不多了。然后分装的时候记得缓缓降温,先降温到室温,然后4度,-20。这样可以保证溶解液过饱和,否则下次你拿出来会有结晶体,又要加热溶解了在用。麻烦的
5楼2014-08-17 15:01:48
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