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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 提蛋白试剂的制备方法
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chang坤

金虫 (正式写手)

[求助] 提蛋白试剂的制备方法 已有1人参与

在提取菌体蛋白的方法中，0.7M蔗糖，0.5M Tris-HCl （pH=7）,30mM HCl,50mM EDTA(pH=8),0.1M KCl,40mM DTT定容到25mL如何配置？
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为了理想拼了！
1楼 2014-08-16 18:22:48
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chang坤 at 2014-08-17 11:18:47
亲，这个要定容到多少mL? 用超声还是用液氮提取蛋白，有没有参考文献？...

100ml，文献很多的，你随便搜一篇蛋白质组学文章都有的。成分大差不差。做做WB蛮好的，如果是纯化蛋白的话会麻烦点，建议不用。因为会把蛋白亚基分离，所以蛋白溶解度会提高很多，但是不会影响蛋白活性和结构，因为分离是可逆的。
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4楼2014-08-17 14:59:35
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chang坤: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-08-17 11:16:02
30mM HCl,50mM EDTA(pH=8) 这个是啥？
我用的是这个
7M尿素
2M硫脲
0.5%CHAPs
0.05M Tris-Hcl
效果蛮好的，不妨试试。tris HCL也可以适当提高，根据自己的蛋白浓度，浓度高就多加点。样品可以用来做WB，共沉淀，蛋白质组。
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2楼2014-08-16 22:29:47
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chang坤

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-16 22:29:47
30mM HCl,50mM EDTA(pH=8) 这个是啥？
我用的是这个
7M尿素
2M硫脲
0.5%CHAPs
0.05M Tris-Hcl
效果蛮好的，不妨试试。tris HCL也可以适当提高，根据自己的蛋白浓度，浓度高就多加点。样品可以用来做WB，共沉淀 ...

亲，这个要定容到多少mL? 用超声还是用液氮提取蛋白，有没有参考文献？
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为了理想拼了！
3楼2014-08-17 11:18:47
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:29:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-17 14:59:35
100ml，文献很多的，你随便搜一篇蛋白质组学文章都有的。成分大差不差。做做WB蛮好的，如果是纯化蛋白的话会麻烦点，建议不用。因为会把蛋白亚基分离，所以蛋白溶解度会提高很多，但是不会影响蛋白活性和结构，因为 ...

对了。制作的时候最好稍微加加热，到个37度差不多了。然后分装的时候记得缓缓降温，先降温到室温，然后4度，-20。这样可以保证溶解液过饱和，否则下次你拿出来会有结晶体，又要加热溶解了在用。麻烦的
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5楼2014-08-17 15:01:48
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