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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教DNA电泳的浓度及电压时间设置
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Insecta_A

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教DNA电泳的浓度及电压时间设置 已有5人参与

大家好，我PCR产物预计大小在90—200左右，请问我用琼脂糖电泳时胶的浓度选择多少？同时电泳时的电压以及时间？谢谢！
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1楼 2014-08-13 08:58:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Insecta_A: 金币+2, ★有帮助 2014-08-13 10:42:01
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-13 12:29:26
用2%～2.5%便可。
电压90V就可以了，不要太高。
时间半小时内（20～30min应该就可以了，可以经常看看）
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2楼2014-08-13 09:14:59
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盛夏海棠

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Insecta_A: 金币+1, ★有帮助 2014-08-13 10:42:09
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-13 12:29:33
PCR产物片段越小跑的越快，需要用浓度高些的胶，2%就可以，电压高的话跑的也快，一般loading buffer会有指示作用，一般跑到胶的一半时就可以看结果了
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天道酬勤
3楼2014-08-13 09:18:01
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hbsdz

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Insecta_A at 2014-08-22 10:30:01
请问，我一般用微波炉中火打2分钟左右，我感觉微波炉在加热的时候会蒸发，如果做2%的胶（0.7g+35ml 1X TAE）是不是真实的胶浓度就会高一些，所以我想请问你平时在做的时候，大概会多加多少ml的缓冲液来弥补蒸发的损 ...

我也是用的2分钟微波炉加热，我一般多加2-4mL的1X TAE溶液。110V  20----25分钟左右。希望可以帮到你。
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我的邮箱：hbsdzml@163.com
11楼2014-09-10 11:10:02
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普通回帖

ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-13 12:29:48
Insecta_A: 金币+1, ★有帮助 2014-08-13 20:45:35
琼脂糖浓度/％         0.3         0.6         0.7         0.9         1.2         1.5         2.0
线状DNA大小/kb         60－5         20－1         10－0.8         7－0.5         6－0.4         4－0.2         3－0.1
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4楼2014-08-13 12:13:45
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Insecta_A

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-13 09:14:59
用2%～2.5%便可。
电压90V就可以了，不要太高。
时间半小时内（20～30min应该就可以了，可以经常看看）

请问，我一般用微波炉中火打2分钟左右，我感觉微波炉在加热的时候会蒸发，如果做2%的胶（0.7g+35ml 1X TAE）是不是真实的胶浓度就会高一些，所以我想请问你平时在做的时候，大概会多加多少ml的缓冲液来弥补蒸发的损失？
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5楼2014-08-22 10:30:01
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader
引用回帖:
5楼: Originally posted by Insecta_A at 2014-08-21 14:30:01
请问，我一般用微波炉中火打2分钟左右，我感觉微波炉在加热的时候会蒸发，如果做2%的胶（0.7g+35ml 1X TAE）是不是真实的胶浓度就会高一些，所以我想请问你平时在做的时候，大概会多加多少ml的缓冲液来弥补蒸发的损 ...

两分钟是不是太长了？微波炉的功率多大？
一般不需要这么长时间。只要看到开了就停下来，摇动一会。过几分钟基本就可以了。如果仍然没有完全溶解，则可以继续加热一会，仍然不需要长时间处于沸腾状态。
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6楼2014-08-22 10:36:05
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
Insecta_A: 金币+1, ★有帮助 2014-08-22 15:53:48
2%胶，140V以内就行，电压高跑的快一些，Loading Buffer电泳速度与300bp大小DNA速度一样，所以别让loading buffer跑太前，跑到胶一半处就差不多了。。。
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Someone
7楼2014-08-22 11:05:31
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Insecta_A

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-22 10:36:05
两分钟是不是太长了？微波炉的功率多大？
一般不需要这么长时间。只要看到开了就停下来，摇动一会。过几分钟基本就可以了。如果仍然没有完全溶解，则可以继续加热一会，仍然不需要长时间处于沸腾状态。...

用的中火，你们一般是怎样做的呢
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8楼2014-08-22 15:53:20
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清晨甲壳虫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
Insecta_A(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-10 18:14:18
我们常用 1%琼脂糖凝胶，电压130∨电压。具体取决于核酸片段大小，浮动应该不大～

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9楼2014-08-22 16:15:15
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清晨甲壳虫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
Insecta_A(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-10 18:14:30
超纯水加入琼脂糖之后，微波炉中高火五分钟左右，看到底部沸腾气泡即可～

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10楼2014-08-22 16:17:05
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