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细胞培养问题 已有5人参与
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最近在养大肠癌细胞Lovo。出现个问题很是困扰我——细胞总是抱团粘连（一般5-15个一团）。 刚传代接种时就这样，抱团细胞在2/3以上。以后随着培养时间的进展，抱团细胞会长成稠密的一片，看不到细胞轮廓，模糊的一片，上面还有分散的单个圆的细胞，就像一个大烧饼上撒着一些芝麻。。。细胞有层叠，这样势必会使很多底层的细胞摄取营养不良，所以培养基虽然消耗的很快，细胞长的也快（因为太稠密不只一层），但总是有不少的漂浮细胞。最主要的是我下一步要做转染，这样的生长状态我是没法看转染效率的，连细胞轮廓都没有，最后都是一坨一坨的，郁闷！ 培养情况：10%胎牛血清的DMEM培养基，25cm^2培养瓶。消化时间2分钟，终止消化后离心600rpm 5min。 分析可能的原因：1、消化时间短；2、一开始接种密度就偏大，细胞过密，加上传代晚，细胞生长过度；3、血清比例高；4、消化后吹打不均匀 以上原因，1和4都针对地试过相应的操作，没什么效果，可排除。3还未试。自己感觉像第二个，但一次生长过度怎么会使细胞以后一直互相粘连？？ 本人能想到的就这些了，问题尚未解决，还望高人指点啊~  IMG_20140810_122052.jpg  IMG_20140810_122115.jpg |
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【答案】应助回帖
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正如楼上所言，有的细胞就是这样喜欢扎堆，可以请教实验室养过这种细胞的师姐师兄~ 我没养过这种细胞，单就我之前养细胞的经验看，我感觉是消化时间可能长了，消化的可能有点过呢，细胞消化不充分的话，不容易吹起来，你在传代的时候是否发现这种现象？细胞消化过了的话，首先细胞特别容易吹起来，而且会出现成团现象（你可以在终止消化的时候镜检观察是否有大量成团细胞），其次，消化过了的话有些细胞膜被损坏了，细胞慢慢就死亡了，所以在后续的培养的时候培养基中漂浮的细胞相对多些~另外，细胞成团也有可能是你传代的时候没有将细胞吹匀的原因~ 楼主说的单个圆的细胞，可能是消化后状态不好不能正常贴壁的细胞，也有可能是成堆的细胞刚刚分裂但是还没来得及贴壁的细胞~ |
4楼2014-08-12 16:09:32
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tys0713104
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