应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞培养问题
51/1返回列表
查看: 1720  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hakkie

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞培养问题 已有5人参与

最近在养大肠癌细胞Lovo。出现个问题很是困扰我——细胞总是抱团粘连（一般5-15个一团）。
    刚传代接种时就这样，抱团细胞在2/3以上。以后随着培养时间的进展，抱团细胞会长成稠密的一片，看不到细胞轮廓，模糊的一片，上面还有分散的单个圆的细胞，就像一个大烧饼上撒着一些芝麻。。。细胞有层叠，这样势必会使很多底层的细胞摄取营养不良，所以培养基虽然消耗的很快，细胞长的也快（因为太稠密不只一层），但总是有不少的漂浮细胞。最主要的是我下一步要做转染，这样的生长状态我是没法看转染效率的，连细胞轮廓都没有，最后都是一坨一坨的，郁闷！
    培养情况：10%胎牛血清的DMEM培养基，25cm^2培养瓶。消化时间2分钟，终止消化后离心600rpm 5min。
    分析可能的原因：1、消化时间短；2、一开始接种密度就偏大，细胞过密，加上传代晚，细胞生长过度；3、血清比例高；4、消化后吹打不均匀
    以上原因，1和4都针对地试过相应的操作，没什么效果，可排除。3还未试。自己感觉像第二个，但一次生长过度怎么会使细胞以后一直互相粘连？？
    本人能想到的就这些了，问题尚未解决，还望高人指点啊~

细胞培养问题
IMG_20140810_122052.jpg


细胞培养问题-1
IMG_20140810_122115.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-11 22:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hakkie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by siyecao1121 at 2014-08-12 16:09:32
正如楼上所言，有的细胞就是这样喜欢扎堆，可以请教实验室养过这种细胞的师姐师兄~
我没养过这种细胞，单就我之前养细胞的经验看，我感觉是消化时间可能长了，消化的可能有点过呢，细胞消化不充分的话，不容易吹起 ...

首先谢谢回复！
1、问过养过这个细胞的老师，说这样粘连是不正常的。
2、我的消化时间不算长，养过这个细胞的老师说他都是消化四五分钟。我消化时也注意到消化时间长会导致细胞明显粘连，所以在两三分钟的时候看细胞都有脱落的趋势了就及时终止消化了。之前也考虑过消化后细胞没有吹打混匀，试过吹打上百下，还是成团打不散！
3、所用培养基中的胎牛血清，刚到时我直接在37℃解冻的，不知道这会不会导致现在的情况。
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-18 16:22:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能根本不是你的问题。许多细胞在培养时就这德行，喜欢扎堆。这种情况下就不是异常现象了。
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-12 00:01:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
貌似是消化细胞的时候分散不够好。
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-12 14:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

siyecao1121

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hakkie: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-12-07 22:11:54
正如楼上所言，有的细胞就是这样喜欢扎堆，可以请教实验室养过这种细胞的师姐师兄~
我没养过这种细胞，单就我之前养细胞的经验看，我感觉是消化时间可能长了，消化的可能有点过呢，细胞消化不充分的话，不容易吹起来，你在传代的时候是否发现这种现象？细胞消化过了的话，首先细胞特别容易吹起来，而且会出现成团现象（你可以在终止消化的时候镜检观察是否有大量成团细胞），其次，消化过了的话有些细胞膜被损坏了，细胞慢慢就死亡了，所以在后续的培养的时候培养基中漂浮的细胞相对多些~另外，细胞成团也有可能是你传代的时候没有将细胞吹匀的原因~
楼主说的单个圆的细胞，可能是消化后状态不好不能正常贴壁的细胞，也有可能是成堆的细胞刚刚分裂但是还没来得及贴壁的细胞~
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-12 16:09:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭