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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 荧光定量试验扩增曲线近似一条直线是怎么回事
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mumu1990

铜虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量试验扩增曲线近似一条直线是怎么回事 已有3人参与

如图，用的是SYBR，坐等

荧光定量试验扩增曲线近似一条直线是怎么回事
XLMHBDWZ%M~R2C3U0%N[QUN.jpg
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1楼 2014-08-07 19:58:05
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这是没有扩增吗？溶解曲线怎样？先把产物跑个电泳看看。
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www------sr-------------
2楼2014-08-07 21:44:30
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mumu1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-07 21:44:30
这是没有扩增吗？溶解曲线怎样？先把产物跑个电泳看看。

看趋势应该是有扩增，只是开始的太早，不知道扩增了神马，溶解曲线也是单一峰，产物扔掉了。。。
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3楼2014-08-07 22:04:22
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mumu1990 at 2014-08-07 22:04:22
看趋势应该是有扩增，只是开始的太早，不知道扩增了神马，溶解曲线也是单一峰，产物扔掉了。。。...

扩增效率多少？
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www------sr-------------
4楼2014-08-10 09:33:11
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mumu1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2014-08-10 09:33:11
扩增效率多少？...

我没做标曲
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5楼2014-08-11 19:43:43
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

不知道你有没有定基线，一般情况下，第一个循环不会出现这么明显的荧光的。纵坐标是什么意思，没看懂。我看你曲线数量级跟误差的数量级差不多，很有可能这个曲线也不属于扩增曲线，仍然是属于误差。你定下基线然后统一分析下看看。照理说阴性的不规则曲线应该远远低于扩增曲线
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6楼2014-08-13 16:57:14
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-13 16:57:14
不知道你有没有定基线，一般情况下，第一个循环不会出现这么明显的荧光的。纵坐标是什么意思，没看懂。我看你曲线数量级跟误差的数量级差不多，很有可能这个曲线也不属于扩增曲线，仍然是属于误差。你定下基线然后统 ...

另外，如果有SYBR做的real time，假阳性很容易出现的，你加的燃料是不是过多了呢
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7楼2014-08-13 16:59:20
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议楼主先不加染料，用引物做个PCR看看是否有目的产物，如果有可能是在荧光定量过程中加入的染料太多或你用的起始模板量太大，造成起峰太早
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没有比脚更长的路，没有比人更高的山
8楼2014-08-14 11:56:59
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qq693989099

新虫 (初入文坛)
楼主最后问题解决了吗？
我也遇到这个问题了，怎么解决啊
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9楼2015-10-19 09:34:01
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