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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量试验中的ddw也出现扩增是污染了吗?

大家帮帮我吧,做荧光定量实验有三个月了,可是每次ddw的阴性对照都出现扩增,但是他的CT值非常大,不在有效期内。我发现这问题后非常注意防污染的问题,改进了很多的实验操作方面的问题,但还是不行,问问大家这如何避免,还是避免不了。还有我做的是植物病理方面的,我做的健康枝条的叶片也有扩增,如何判断是不是阳性?我用的是ABI的stepone,绝对定量实验。
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yhbletter

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-08 15:05:24
你有溶解曲线的图吗,你可以将你印象对照的溶解曲线和你实验组的溶解曲线对照一下,如果阴性对照有一个溶解曲线峰,而实验组有两个峰,且有一个峰和阴性对照组差不多,那可以判断不是污染,而是你引物有问题
2楼2013-07-08 14:27:46
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先看阴性对照的熔解曲线和阳性扩增的熔解曲线峰图是否一样,一样的话就是有污染了(尤其是你实验室一直扩这一个基因,很有可能已经有气溶胶污染),不一样的话就是引物二聚体,就不用担心了
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2013-07-09 15:09:23
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

???????:
2?: Originally posted by yhbletter at 2013-07-08 14:27:46
??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????壬??????????????壬????????????????????????????ж?????????????????????????

我是用探针法???的
4楼2013-08-15 23:45:53
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