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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量试验中的ddw也出现扩增是污染了吗？
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量试验中的ddw也出现扩增是污染了吗？

大家帮帮我吧，做荧光定量实验有三个月了，可是每次ddw的阴性对照都出现扩增，但是他的CT值非常大，不在有效期内。我发现这问题后非常注意防污染的问题，改进了很多的实验操作方面的问题，但还是不行，问问大家这如何避免，还是避免不了。还有我做的是植物病理方面的，我做的健康枝条的叶片也有扩增，如何判断是不是阳性？我用的是ABI的stepone，绝对定量实验。
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1楼 2013-07-08 10:03:59
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yhbletter

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-08 15:05:24
你有溶解曲线的图吗，你可以将你印象对照的溶解曲线和你实验组的溶解曲线对照一下，如果阴性对照有一个溶解曲线峰，而实验组有两个峰，且有一个峰和阴性对照组差不多，那可以判断不是污染，而是你引物有问题
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2楼2013-07-08 14:27:46
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先看阴性对照的熔解曲线和阳性扩增的熔解曲线峰图是否一样，一样的话就是有污染了（尤其是你实验室一直扩这一个基因，很有可能已经有气溶胶污染），不一样的话就是引物二聚体，就不用担心了
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2013-07-09 15:09:23
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不离不弃1215

铜虫 (小有名气)
???????:
2?: Originally posted by yhbletter at 2013-07-08 14:27:46
??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????壬??????????????壬????????????????????????????ж?????????????????????????

我是用探针法???的
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4楼2013-08-15 23:45:53
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