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mayibuku木虫 (小有名气)
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用合成多肽跑tricine SDS-PAGE 胶，但是看不见条带 已有4人参与
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如题，多肽是自己合成的，分子量5K，跑tricine SDS-PAGE完全看不到条带，但是我用的marker最下面一条带是3.4K的多肽，marker跑胶条带就非常清楚，用的是考马斯亮蓝染色 我想问下多肽跑胶和蛋白有什么区别吗？为什么marker的多肽能看到，我自己的多肽就看不到呢？是不是多肽需要用很高的浓度才能看到条带啊 |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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【答案】应助回帖
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多肽跑胶和蛋白的一个重要区别是对凝胶浓度的要求不同，多肽的分子量小组成其的氨基酸的数量小，所以多肽跑胶时需要的凝胶的交联度要更高，否则在凝胶上呆不住，类似于电流短路。凝胶的交联度高到一定程度，普通的聚丙烯酰胺凝胶就不足以应对了，所以要用tricine SDS-PAGE。 普通的聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系： 聚丙烯酰胺凝胶浓度（%T） 蛋白质分离范围/kd 5 36—200 6 30—200 8 20—175 10 15—150 12 10—100 15 6—50 另外，电泳中使用各种溶液也有差别。 请参考： Tricine–SDS-PAGE-Nature_Protrocols(2006).pdf http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6121608 |
3楼2014-08-23 21:00:51
牛焕杰
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