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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 用合成多肽跑tricine SDS-PAGE 胶，但是看不见条带
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mayibuku

木虫 (小有名气)

[求助] 用合成多肽跑tricine SDS-PAGE 胶，但是看不见条带已有4人参与

如题，多肽是自己合成的，分子量5K，跑tricine SDS-PAGE完全看不到条带，但是我用的marker最下面一条带是3.4K的多肽，marker跑胶条带就非常清楚，用的是考马斯亮蓝染色
我想问下多肽跑胶和蛋白有什么区别吗？为什么marker的多肽能看到，我自己的多肽就看不到呢？是不是多肽需要用很高的浓度才能看到条带啊
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1楼2014-08-02 15:05:54
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pengchenping

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mayibuku: 金币+1, 可是多肽样品很珍贵啊，没有这么多可以用来浪费的 2014-08-04 16:17:13
你做个浓度剃度看看吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-08-03 16:47:06
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

多肽跑胶和蛋白的一个重要区别是对凝胶浓度的要求不同，多肽的分子量小组成其的氨基酸的数量小，所以多肽跑胶时需要的凝胶的交联度要更高，否则在凝胶上呆不住，类似于电流短路。凝胶的交联度高到一定程度，普通的聚丙烯酰胺凝胶就不足以应对了，所以要用tricine SDS-PAGE。
普通的聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度（%T） 蛋白质分离范围/kd
5                        36—200
6                        30—200
8                        20—175
10                       15—150
12                       10—100
15                        6—50
另外，电泳中使用各种溶液也有差别。
请参考：
Tricine–SDS-PAGE-Nature_Protrocols(2006).pdf
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6121608
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3楼2014-08-23 21:00:51
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牛焕杰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

咱俩应该用的marker是一样的，我的样品也是没有跑出条带，marker是跑出条带了，但是条带不整齐，能不能交流一下？
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4楼2014-10-07 17:21:54
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karkilin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也碰到相似的问题，marker跑出来了，但小分子的肽没有条带，我猜是样品buffer出问题了
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有限的生命探索无穷的世界
5楼2015-02-07 16:24:08
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