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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 发酵产物测定问题
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思凡

木虫 (正式写手)

[求助] 发酵产物测定问题 已有3人参与

本人最近在用5L发酵罐做实验，根据一些参数变化，我可以确定在长产物，但我每隔六小时取次样，测出来有时长很多，有时数值反而变小了，我的菌代谢太旺盛了，一直要加很多消泡剂，不然就跑液，其中消泡剂和水的比例是1：10，会不会打个比方，本来3L里有33克，这样测出来11g/L，它长到了40克，我也加了很多消泡剂，比如1L，反而测出来没有11g/L了，这样我怎么知道我那个罐里具体实际产了多少产物呢？望大家帮忙想想办法，谢谢啦

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1楼 2014-07-30 09:13:10
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思凡

木虫 (正式写手)
没人回答嘛，现在用的有机硅消泡剂，下罐准备换种试试，不知有没有什么效果比较好对菌伤害又小的消泡剂

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2楼2014-07-30 16:32:26
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crayoon

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
思凡: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-08-03 09:28:42
可以试试GPE型的消泡剂，聚醚类的。消泡剂用的多，就配浓度高一点的试试。
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3楼2014-07-31 18:38:26
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思凡

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by crayoon at 2014-07-31 18:38:26
可以试试GPE型的消泡剂，聚醚类的。消泡剂用的多，就配浓度高一点的试试。

嗯，现在就在用聚醚类的，不敢配浓度太高，怕对菌有伤害，请问一下，您们一般配什么浓度的
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4楼2014-08-03 09:30:25
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crayoon

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 思凡 at 2014-08-03 09:30:25
嗯，现在就在用聚醚类的，不敢配浓度太高，怕对菌有伤害，请问一下，您们一般配什么浓度的...

我做的气泡不厉害，中间不需要加消泡剂，配培养基的时候加万分之一的消泡剂原液。消泡剂对菌的伤害，你可以做个梯度实验看看，消泡剂到多少浓度对菌有伤害。
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5楼2014-08-03 10:18:42
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思凡

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by crayoon at 2014-08-03 10:18:42
我做的气泡不厉害，中间不需要加消泡剂，配培养基的时候加万分之一的消泡剂原液。消泡剂对菌的伤害，你可以做个梯度实验看看，消泡剂到多少浓度对菌有伤害。...

好的，我知道了，谢谢
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6楼2014-08-03 20:36:39
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毛桃就是我

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
思凡: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-08-04 22:07:13
根据菌体类型、代谢产物选择消泡剂，比如，我们用的是氨基酸专用消泡剂！
美国陶氏103也不错！
消泡剂不稀释也可以用，到时候蠕动泵点一滴就ok了。
6个小时取一次样，时间太长了，估计中间控制也不精细，所以产量才不稳！
此外，灭菌也很重要，原位灭菌的话，建议关小排气，以最小的排气量消罐，这样泡沫能控制的非常小。
前期，尽量提转速，转速提的差不多了，适量提风，再提罐压。
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木有签名呀！
7楼2014-08-04 11:32:49
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sunqingfeng1

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
思凡: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-08-04 22:07:24
这个问题应该分三方面去考虑：
    1、消泡剂对产物有损害，换消泡剂或提高罐压试试。
    2、菌种或者工艺有问题。前期菌种长得比较好，你认为他的产率比较高，到一定周期就长得很慢了，或者基本可以判定是发酵终点了。这需要你涂片看看细胞形态，如果有尾气分析就更好了，算下OUR，看看变化趋势。我们之前做的新产品研发时，菌株有问题或工艺有问题，效价就是时间不长就下来了。
    3、如果产物浓度有时涨得多，有时不涨或者减少，怀疑你测样误差所致，检测你的检测试剂、仪器、测样人。
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发酵小家
8楼2014-08-04 11:46:17
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思凡

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 毛桃就是我 at 2014-08-04 11:32:49
根据菌体类型、代谢产物选择消泡剂，比如，我们用的是氨基酸专用消泡剂！
美国陶氏103也不错！
消泡剂不稀释也可以用，到时候蠕动泵点一滴就ok了。
6个小时取一次样，时间太长了，估计中间控制也不精细，所以产量 ...

非常感谢您的回答，我解释一下，以前四小时取一次，被几个老师都说没必要，太频繁了，所以改成六小时的，我看做我们这个的，大多数SCI论文都是八小时甚至12小时测定一下，控制的话我们是24小时有人看着进行控制的，严格控制我们需要的pH和溶氧的，我们的设备只能离线灭菌，最后一条的话，我们现在只能尽量这么做，我们把一些需要的单因素全做了，包括转速，通气，罐压，现在综合起来操作了，有时候有点难处理，我是我们这边第一个做这个的，没什么经验，只能慢慢摸索了
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9楼2014-08-04 22:06:55
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思凡

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sunqingfeng1 at 2014-08-04 11:46:17
这个问题应该分三方面去考虑：
    1、消泡剂对产物有损害，换消泡剂或提高罐压试试。
    2、菌种或者工艺有问题。前期菌种长得比较好，你认为他的产率比较高，到一定周期就长得很慢了，或者基本可以判定是发酵终 ...

非常感谢您的回答，很有帮助，消泡剂的话，我们现在按照消泡剂公司的建议量进行添加的，因为我们没有做实验，所以先按他们建议的试一下。您提到的第二点很有帮助，我在接下来会注意的。第三点的话试剂和仪器应该都没有什么问题，测样人的话我们白天和晚上是两个人测的，接下来我会多注意的。
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10楼2014-08-04 22:19:16
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