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smileface126铁虫 (初入文坛)
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考马斯亮蓝法测试中的几个问题 已有1人参与
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关于考马斯亮蓝法，有几个问题想请教一下 1、测试条件酸碱性影响大吗，看有说是在酸性条件下测试。 2、将含蛋白质样品消化溶解后一定要离心取清液吗 3、吸光度测试范围。据说吸光度高测定浓度偏离标准曲线，又从一个文章中看到测试范围在0.1-0.05，是不是也不至于这么低呢 |
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hsd3521
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zybpxy: 食品EPI+1 2014-07-27 22:04:29
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zybpxy: 食品EPI+1 2014-07-27 22:04:29
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1. 高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。之所以选择酸性是因为G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色。 2.该方法是测定可溶性蛋白，必须取上清液，沉淀会影响读数 3.蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，基于紫外可见光分光光度计的灵敏度，最好是将蛋白浓度调制最大吸光度在0.8以下进行标准曲线的绘制，也就是后面的文献比较靠谱些，蛋白浓度大，你会发现你绘制的标准曲线后面基本平行，变成了一条抛物线 个人解释，如不对请指正，谢谢 |
2楼2014-07-27 19:36:27
smileface126
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3楼2014-07-27 21:25:12
