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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 考马斯亮蓝法测试中的几个问题
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smileface126

铁虫 (初入文坛)

[交流] 考马斯亮蓝法测试中的几个问题 已有1人参与

关于考马斯亮蓝法，有几个问题想请教一下
1、测试条件酸碱性影响大吗，看有说是在酸性条件下测试。
2、将含蛋白质样品消化溶解后一定要离心取清液吗
3、吸光度测试范围。据说吸光度高测定浓度偏离标准曲线，又从一个文章中看到测试范围在0.1-0.05，是不是也不至于这么低呢
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需要学习的太多，慢慢学起
1楼 2014-07-27 15:50:34
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zybpxy: 食品EPI+1 2014-07-27 22:04:29
1. 高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。之所以选择酸性是因为G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色。
2.该方法是测定可溶性蛋白，必须取上清液，沉淀会影响读数
3.蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，基于紫外可见光分光光度计的灵敏度，最好是将蛋白浓度调制最大吸光度在0.8以下进行标准曲线的绘制，也就是后面的文献比较靠谱些，蛋白浓度大，你会发现你绘制的标准曲线后面基本平行，变成了一条抛物线
个人解释，如不对请指正，谢谢
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太胖了！~
2楼2014-07-27 19:36:27
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smileface126

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hsd3521 at 2014-07-27 19:36:27
1. 高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。之所以选择酸性是因为G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变 ...

谢谢，把我不确定的地方确定了答案。我是搞印染的，考马斯亮蓝是染料，所以想多了解一下。暂时还没用过这种方法做过实验，正准备做，所以要搞搞明白。谢谢你的指导。那我再问一下，我在测试过程中，标线确定后，测试样的过程中应该不存在再调PH值的问题吧。
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需要学习的太多，慢慢学起
3楼2014-07-27 21:25:12
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