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smileface126

铁虫 (初入文坛)

[交流] 考马斯亮蓝法测试中的几个问题 已有1人参与

关于考马斯亮蓝法,有几个问题想请教一下
1、测试条件酸碱性影响大吗,看有说是在酸性条件下测试。
2、将含蛋白质样品消化溶解后一定要离心取清液吗
3、吸光度测试范围。据说吸光度高测定浓度偏离标准曲线,又从一个文章中看到测试范围在0.1-0.05,是不是也不至于这么低呢
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hsd3521

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zybpxy: 食品EPI+1 2014-07-27 22:04:29
1. 高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时,改变测定液pH值会影响显色。之所以选择酸性是因为G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质通过范德华键结合后,变为蓝色。
2.该方法是测定可溶性蛋白,必须取上清液,沉淀会影响读数
3.蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律,基于紫外可见光分光光度计的灵敏度,最好是将蛋白浓度调制最大吸光度在0.8以下进行标准曲线的绘制,也就是后面的文献比较靠谱些,蛋白浓度大,你会发现你绘制的标准曲线后面基本平行,变成了一条抛物线
个人解释,如不对请指正,谢谢
太胖了!~
2楼2014-07-27 19:36:27
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smileface126

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hsd3521 at 2014-07-27 19:36:27
1. 高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时,改变测定液pH值会影响显色。之所以选择酸性是因为G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质通过范德华键结合后,变 ...

谢谢,把我不确定的地方确定了答案。我是搞印染的,考马斯亮蓝是染料,所以想多了解一下。暂时还没用过这种方法做过实验,正准备做,所以要搞搞明白。谢谢你的指导。那我再问一下,我在测试过程中,标线确定后,测试样的过程中应该不存在再调PH值的问题吧。
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3楼2014-07-27 21:25:12
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