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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教关于PAGE胶跑DNA问题
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2009442038

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教关于PAGE胶跑DNA问题 已有1人参与

请教几点关于PAGE胶跑DNA问题：
1 100-700bp的DNA用PAGE胶浓度多大为好？
2 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺比例多少为好？29:1 or 37.5:1
3 跑完的胶用stain dye 或者gel red （1:10000）染色20min，条带会有拖尾，有时候胶孔有滞留的东东，是什么原因呢？（样品中有DNA和蛋白和离子），谢谢
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1楼 2014-07-18 15:34:57
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-07-19 20:51:33
聚丙烯酰胺凝胶孔径的大小是由丙烯酰胺的浓度决定的，不同浓度丙烯酰胺和DNA的 有效分离范围见表
丙烯酰胺(%) 有效分离范围(bp)
3.5 100～2000
5.0 80～500
8.0 60～400
12.0 40～200
15.0 25～150
20.0 10～100
所以想达到对DNA最佳分辨,与胶的浓度和合适的电压,电泳时间有关.不能绝对的说浓度越高,分辨的越好,因为电压和电泳时间也很重要,建议您看一下这个链接http://www.technew.cn/?m=news&s=newsd&id=6900
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相信自己，永不言弃
2楼2014-07-19 15:41:47
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2009442038

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyunjian at 2014-07-19 15:41:47
聚丙烯酰胺凝胶孔径的大小是由丙烯酰胺的浓度决定的，不同浓度丙烯酰胺和DNA的 有效分离范围见表
丙烯酰胺(%) 有效分离范围(bp)
3.5 100～2000
5.0 80～500
8.0 60～400
12.0 40～200
15.0 25～150
20 ...

非常感谢！可以再请教您个问题吗？样品中是DNA和蛋白的混合物，跑SDS-PAGE胶进行DNA电泳，gel-red染色后，紫外成像，发现有大量DNA阻塞在胶孔的位置，没有跑下来。有什么解决办法吗？谢谢
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3楼2014-07-21 20:29:01
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)
★ ★
2009442038(dllchina代发): 金币+2, 鼓励热心应助 2014-07-21 22:55:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by 2009442038 at 2014-07-21 20:29:01
非常感谢！可以再请教您个问题吗？样品中是DNA和蛋白的混合物，跑SDS-PAGE胶进行DNA电泳，gel-red染色后，紫外成像，发现有大量DNA阻塞在胶孔的位置，没有跑下来。有什么解决办法吗？谢谢...

您的胶，交联的孔太小？还是您的dna片段大小不在您所配的胶的范围内，建议您可以在把dna剪短点，或调整胶配比
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相信自己，永不言弃
4楼2014-07-21 22:06:20
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2009442038

新虫 (初入文坛)
我用的是跑蛋白的胶跑的DNA，TBEbuffer。或许我应该换成TBE配的DNA PAGE胶（您分享的链接）试试，谢谢您
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5楼2014-07-22 20:28:23
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