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尚瑾

铜虫 (小有名气)

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注册: 2012-03-11
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专业: 动物病理学

[求助] 求问诸位：电泳总是跑不好是什么原因？

我们实验室有个顽固性难题，就是电泳图一个比一个难看，我们用胶红染的，配1%的琼脂糖，100V25分钟，连Marker都跑花了，请教高人知道一下，直接上图吧

2.png

对照.png

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年轻就应该拿出年轻的劲头

1楼 2013-03-20 10:39:28

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mathewlyx

铜虫 (小有名气)

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专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚瑾: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2013-03-20 14:36:06
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流经验！ 2013-04-27 14:25:28
gyesang: 回帖置顶 2013-04-27 14:25:30

1.胶要煮匀，不要用凉水冲直接沸腾就倒，浓度太大的胶容易凝不均匀
2，电压低点时间跑长点，当然 TAE 缓冲液最好是新配的
3 基因组本来条带就比较弱和你提DNA的质量有关系，
4 上面的Marker不好应该是点样太多了，都拖尾了，上样3ul都够了

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8楼2013-03-20 14:27:59

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hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

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专业: 神经发育、遗传、代谢相关

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚瑾: 金币+1, 跑的是基因组所以用1%，琼脂糖是用微波炉融的，沸腾了 2013-03-20 11:28:15
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:32:30

1% agarose太少了，通常都1.5或2%。再?硎悄阌檬颤N溶液配?還有argarose有全溶嗎?要沸騰，然後搖晃至溶液內無agarose懸浮。作膠時，加下去就不要動它了，所以要一氣呵成

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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科研是無止盡的

2楼2013-03-20 11:00:00

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hraikeyan

金虫 (小有名气)

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专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

是不是染料的问题，我们实验室也出现过这样的问题

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nothing isimpossible

3楼2013-03-20 11:04:35

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119904386

铁虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚瑾: 金币+1, 用的TAE，跑的是基因组 2013-03-20 11:25:35
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:31:13

根据我的经验，两个容易出问题的地方：
1、胶没有溶匀
2、电泳液该换了

还有，配胶的TBE与电泳的TBE最好来自同一瓶

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4楼2013-03-20 11:21:53

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尚瑾

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-03-20 11:04:35
是不是染料的问题，我们实验室也出现过这样的问题

那请问你们后来怎么解决的呢？现在用什么染料？

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年轻就应该拿出年轻的劲头

5楼2013-03-20 11:24:47

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119904386

铁虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:32:04

还有，电压降一下试试。电压不是一定要用100v或是120v，而是5~10v/cm，此处cm为电极距离，而非胶的长度

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6楼2013-03-20 11:26:13

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amilie030312

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:31:40

胶的浓度一般看你跑的片段大小，一般1.5%，片段过大可以浓度低些，过小可以浓度高些。
如果是我看到这情况，会怀疑电泳液有问题，会把全部电泳液更换一遍，然后胶也重新配过再试，再出现这种情况就换一家公司的琼脂糖试试。但一般琼脂糖的问题比较少出。

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7楼2013-03-20 12:25:59

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尚瑾

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by mathewlyx at 2013-03-20 14:27:59
1.胶要煮匀，不要用凉水冲直接沸腾就倒，浓度太大的胶容易凝不均匀
2，电压低点时间跑长点，当然 TAE 缓冲液最好是新配的
3 基因组本来条带就比较弱和你提DNA的质量有关系，
4 上面的Marker不好应该是点样 ...

能帮我看看，那个下边很亮的条带那是怎么回事？我没有用RNaseA,是因为没有去RNA么？

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年轻就应该拿出年轻的劲头

9楼2013-03-20 14:46:08

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