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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求问诸位：电泳总是跑不好是什么原因？
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尚瑾

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问诸位：电泳总是跑不好是什么原因？

我们实验室有个顽固性难题，就是电泳图一个比一个难看，我们用胶红染的，配1%的琼脂糖，100V25分钟，连Marker都跑花了，请教高人知道一下，直接上图吧

2.png



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年轻就应该拿出年轻的劲头
1楼 2013-03-20 10:39:28
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回帖置顶 ( 共有1个 )

mathewlyx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚瑾: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2013-03-20 14:36:06
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流经验！ 2013-04-27 14:25:28
gyesang: 回帖置顶 2013-04-27 14:25:30
1.胶要煮匀， 不要用凉水冲 直接沸腾就倒，浓度太大的胶容易凝不均匀
2，电压低点 时间跑长点，当然 TAE 缓冲液最好是新配的
3  基因组本来条带就比较弱 和你提DNA的质量有关系，
4 上面的Marker不好 应该是点样太多了，都拖尾了，上样3ul都够了
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8楼2013-03-20 14:27:59
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普通回帖

hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚瑾: 金币+1, 跑的是基因组所以用1%，琼脂糖是用微波炉融的，沸腾了 2013-03-20 11:28:15
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:32:30
1% agarose太少了，通常都1.5或2%。再?硎悄阌檬颤N溶液配?還有argarose有全溶嗎?要沸騰，然後搖晃至溶液內無agarose懸浮。作膠時，加下去就不要動它了，所以要一氣呵成

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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科研是無止盡的
2楼2013-03-20 11:00:00
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是染料的问题，我们实验室也出现过这样的问题
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nothing isimpossible
3楼2013-03-20 11:04:35
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119904386

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
尚瑾: 金币+1, 用的TAE，跑的是基因组 2013-03-20 11:25:35
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:31:13
根据我的经验，两个容易出问题的地方：
1、胶没有溶匀  
2、电泳液该换了

还有，配胶的TBE与电泳的TBE最好来自同一瓶
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4楼2013-03-20 11:21:53
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尚瑾

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-03-20 11:04:35
是不是染料的问题，我们实验室也出现过这样的问题

那请问你们后来怎么解决的呢？现在用什么染料？
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年轻就应该拿出年轻的劲头
5楼2013-03-20 11:24:47
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119904386

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:32:04
还有，电压降一下试试。电压不是一定要用100v或是120v，而是5~10v/cm，此处cm为电极距离，而非胶的长度
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6楼2013-03-20 11:26:13
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-20 12:31:40
胶的浓度一般看你跑的片段大小，一般1.5%，片段过大可以浓度低些，过小可以浓度高些。
如果是我看到这情况，会怀疑电泳液有问题，会把全部电泳液更换一遍，然后胶也重新配过再试，再出现这种情况就换一家公司的琼脂糖试试。但一般琼脂糖的问题比较少出。
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7楼2013-03-20 12:25:59
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尚瑾

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mathewlyx at 2013-03-20 14:27:59
1.胶要煮匀， 不要用凉水冲 直接沸腾就倒，浓度太大的胶容易凝不均匀
2，电压低点 时间跑长点，当然 TAE 缓冲液最好是新配的
3  基因组本来条带就比较弱 和你提DNA的质量有关系，
4 上面的Marker不好 应该是点样 ...

能帮我看看，那个下边很亮的条带那是怎么回事？我没有用RNaseA,是因为没有去RNA么？
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年轻就应该拿出年轻的劲头
9楼2013-03-20 14:46:08
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andywang6137

木虫 (著名写手)
左边是PCR产物吗?不是引物二聚体？
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10楼2013-03-20 14:55:22
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