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2009442038

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教关于PAGE胶跑DNA问题已有1人参与

请教几点关于PAGE胶跑DNA问题:
1 100-700bp的DNA用PAGE胶浓度多大为好?
2 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺比例多少为好?29:1 or 37.5:1
3 跑完的胶用stain dye 或者gel red (1:10000)染色20min,条带会有拖尾,有时候胶孔有滞留的东东,是什么原因呢?(样品中有DNA和蛋白和离子),谢谢
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-07-19 20:51:33
聚丙烯酰胺凝胶孔径的大小是由丙烯酰胺的浓度决定的,不同浓度丙烯酰胺和DNA的 有效分离范围见表
丙烯酰胺(%) 有效分离范围(bp)
3.5 100~2000
5.0 80~500
8.0 60~400
12.0 40~200
15.0 25~150
20.0 10~100
所以想达到对DNA最佳分辨,与胶的浓度和合适的电压,电泳时间有关.不能绝对的说浓度越高,分辨的越好,因为电压和电泳时间也很重要,建议您看一下这个链接http://www.technew.cn/?m=news&s=newsd&id=6900
相信自己,永不言弃
2楼2014-07-19 15:41:47
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2009442038

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xuyunjian at 2014-07-19 15:41:47
聚丙烯酰胺凝胶孔径的大小是由丙烯酰胺的浓度决定的,不同浓度丙烯酰胺和DNA的 有效分离范围见表
丙烯酰胺(%) 有效分离范围(bp)
3.5 100~2000
5.0 80~500
8.0 60~400
12.0 40~200
15.0 25~150
20 ...

非常感谢!可以再请教您个问题吗?样品中是DNA和蛋白的混合物,跑SDS-PAGE胶进行DNA电泳,gel-red染色后,紫外成像,发现有大量DNA阻塞在胶孔的位置,没有跑下来。有什么解决办法吗?谢谢
3楼2014-07-21 20:29:01
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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

★ ★
2009442038(dllchina代发): 金币+2, 鼓励热心应助 2014-07-21 22:55:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by 2009442038 at 2014-07-21 20:29:01
非常感谢!可以再请教您个问题吗?样品中是DNA和蛋白的混合物,跑SDS-PAGE胶进行DNA电泳,gel-red染色后,紫外成像,发现有大量DNA阻塞在胶孔的位置,没有跑下来。有什么解决办法吗?谢谢...

您的胶,交联的孔太小?还是您的dna片段大小不在您所配的胶的范围内,建议您可以在把dna剪短点,或调整胶配比
相信自己,永不言弃
4楼2014-07-21 22:06:20
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2009442038

新虫 (初入文坛)

我用的是跑蛋白的胶跑的DNA,TBEbuffer。或许我应该换成TBE配的DNA PAGE胶(您分享的链接)试试,谢谢您
5楼2014-07-22 20:28:23
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