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zsa513

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问两个关于denature PAGE的问题~ 已有2人参与

我用denature PAGE(urea)跑DNA, 感觉迁移率非常的慢，这是正常的么？我平时跑蛋白顶多1个小时，这样感觉至少要2，3个小时，我跑的DNA片段很小20-70bp，用的12%的胶，请问大牛大概要跑多长时间啊？

还有一个问题，就是我跑觉的时候，current的电压会随着时间变动，我已经选了电泳constant了。以前从来不会变的。这是胶或者buffer有问题么？还是电泳仪mode的问题？还是说跑这种电泳就是会这样？

求大牛解释！多谢！
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1楼 2011-07-03 11:41:16
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zhoujunnju

至尊木虫 (正式写手)
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-03 18:12:15
恒定电压试一试，胶可以10%，buffer可以用新制备的
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2楼2011-07-03 15:54:40
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zsa513

新虫 (初入文坛)
我电压已经选的恒定的了，但是跑起来，就会变

我以前跑胶也是用的12%的，可是跑蛋白的时候速度没问题啊，改泡DNA的时候配方是变了，可是胶的浓度没变啊

继续求解释~
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3楼2011-07-04 01:51:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
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dhd997(金币+3): 2011-07-04 18:06:56
引用回帖:
Originally posted by zsa513 at 2011-07-04 01:51:15:
我电压已经选的恒定的了，但是跑起来，就会变

我以前跑胶也是用的12%的，可是跑蛋白的时候速度没问题啊，改泡DNA的时候配方是变了，可是胶的浓度没变啊

继续求解释~

缓冲液的问题或者是电泳仪设定的问题。

电泳液的体系是随着电泳的进行是不断变化的，可以设定恒压或者恒流，但是恒压时，电流是随着电泳进行不断变大的，反之亦然。
电泳仪有保护功能，设定恒压时，设定的电流为允许的最大电流，当电流超过这个最大值时会自动切换成恒流，此时随着电泳进行变化的就是电压了。

你看看一般跑DNA时的电压是多少，可能是跑蛋白的参数不适合于DNA，可以把最大电流值设置大一些。如果参数设置没错，那就是缓冲液不行，重新配缓冲液。
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4楼2011-07-04 09:46:41
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zsa513

新虫 (初入文坛)
dhd997: 可以引用回复 2011-07-04 18:07:16
非常感谢，前一个问题，请问也能帮我解释下么？
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5楼2011-07-04 11:32:49
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
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引用回帖:
Originally posted by zsa513 at 2011-07-04 11:32:49:
非常感谢，前一个问题，请问也能帮我解释下么？

PAGE胶跑DNA我没做过，等高人解答吧，呵呵。权当顶贴了
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6楼2011-07-04 20:24:01
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zhoujunnju

至尊木虫 (正式写手)
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dhd997(金币+2): good 2011-07-06 07:38:44
这个与你电泳胶的温度也有关系的，温度高速度快点，温度低点速度慢。不过20-70bp建议用10%的胶差不多。天然电泳一般2小时左右，变性一般半小时。不过后者的电压也高。我天然是160V，变性350V。
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7楼2011-07-05 23:55:37
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zsa513

新虫 (初入文坛)
dhd997: 对于你想让谁回答你，可以引用回复。也可以在一楼编辑 2011-07-07 07:44:25
谢谢，可是为什么变性的电压需要的高呢？
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8楼2011-07-07 00:09:45
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