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zsa513

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问两个关于denature PAGE的问题~ 已有2人参与

我用denature PAGE(urea)跑DNA, 感觉迁移率非常的慢,这是正常的么?我平时跑蛋白顶多1个小时,这样感觉至少要2,3个小时,我跑的DNA片段很小20-70bp,用的12%的胶,请问大牛大概要跑多长时间啊?

还有一个问题,就是我跑觉的时候,current的电压会随着时间变动,我已经选了电泳constant了。以前从来不会变的。这是胶或者buffer有问题么?还是电泳仪mode的问题?还是说跑这种电泳就是会这样?

求大牛解释!多谢!
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zhoujunnju

至尊木虫 (正式写手)

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dhd997(金币+2): good 2011-07-06 07:38:44
这个与你电泳胶的温度也有关系的,温度高速度快点,温度低点速度慢。不过20-70bp建议用10%的胶差不多。天然电泳一般2小时左右,变性一般半小时。不过后者的电压也高。我天然是160V,变性350V。
7楼2011-07-05 23:55:37
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zhoujunnju

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-07-03 18:12:15
恒定电压试一试,胶可以10%,buffer可以用新制备的
2楼2011-07-03 15:54:40
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zsa513

新虫 (初入文坛)

我电压已经选的恒定的了,但是跑起来,就会变

我以前跑胶也是用的12%的,可是跑蛋白的时候速度没问题啊,改泡DNA的时候配方是变了,可是胶的浓度没变啊

继续求解释~
3楼2011-07-04 01:51:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

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dhd997(金币+3): 2011-07-04 18:06:56
引用回帖:
Originally posted by zsa513 at 2011-07-04 01:51:15:
我电压已经选的恒定的了,但是跑起来,就会变

我以前跑胶也是用的12%的,可是跑蛋白的时候速度没问题啊,改泡DNA的时候配方是变了,可是胶的浓度没变啊

继续求解释~

缓冲液的问题或者是电泳仪设定的问题。

电泳液的体系是随着电泳的进行是不断变化的,可以设定恒压或者恒流,但是恒压时,电流是随着电泳进行不断变大的,反之亦然。
电泳仪有保护功能,设定恒压时,设定的电流为允许的最大电流,当电流超过这个最大值时会自动切换成恒流,此时随着电泳进行变化的就是电压了。

你看看一般跑DNA时的电压是多少,可能是跑蛋白的参数不适合于DNA,可以把最大电流值设置大一些。如果参数设置没错,那就是缓冲液不行,重新配缓冲液。
4楼2011-07-04 09:46:41
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