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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取后用DNase处理问题。
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biofind

新虫 (小有名气)

[求助] RNA提取后用DNase处理问题。 已有2人参与

我的RNA中会有质粒污染，我打算做荧光定量。因此，提完RNA后需要先用DNase酶处理一下（我用的是Promega的）。有几个问题想请教一下大家：
1.用DNase酶处理的过程中，需不需要加RNA酶抑制剂来防止RNA的降解（试剂盒中的操作步骤中没有提到RNA酶抑制剂）？
2.说明书说用DNA酶处理后，需要加EDTA并72度灭活。我想问不灭活，直接取8微升做反转录可不可以？一定需要灭活DNA酶吗？
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1楼 2014-07-14 16:40:58
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biofind

新虫 (小有名气)
是这样，我的RNA中有质粒存在，必须去掉质粒，然后做荧光定量，不是单纯的做个PCR而已，请高手指教
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3楼2014-07-14 22:40:28
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yanbixing

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-14 23:35:38
我提取的RNA没有用DNA酶处理，直接做定量PCR，结果也不错的！
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2楼2014-07-14 22:23:03
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-27 20:13:55
要加RNA酶抑制剂。你可以试试不灭活DNA酶
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4楼2014-07-21 17:56:16
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

一 需要加RNA酶抑制剂，不然会降解严重
二 无需灭活反转录     
本人都亲自做过
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5楼2014-07-31 13:06:51
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