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biofind

新虫 (小有名气)

[求助] RNA提取后用DNase处理问题。 已有2人参与

我的RNA中会有质粒污染,我打算做荧光定量。因此,提完RNA后需要先用DNase酶处理一下(我用的是Promega的)。有几个问题想请教一下大家:
1.用DNase酶处理的过程中,需不需要加RNA酶抑制剂来防止RNA的降解(试剂盒中的操作步骤中没有提到RNA酶抑制剂)?
2.说明书说用DNA酶处理后,需要加EDTA并72度灭活。我想问不灭活,直接取8微升做反转录可不可以?一定需要灭活DNA酶吗?
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yanbixing

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-14 23:35:38
我提取的RNA没有用DNA酶处理,直接做定量PCR,结果也不错的!
2楼2014-07-14 22:23:03
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biofind

新虫 (小有名气)

是这样,我的RNA中有质粒存在,必须去掉质粒,然后做荧光定量,不是单纯的做个PCR而已,请高手指教
3楼2014-07-14 22:40:28
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-07-27 20:13:55
要加RNA酶抑制剂。你可以试试不灭活DNA酶
4楼2014-07-21 17:56:16
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

一 需要加RNA酶抑制剂,不然会降解严重
二 无需灭活反转录     
本人都亲自做过
5楼2014-07-31 13:06:51
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15956118966

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by biofind at 2014-07-14 16:40:58
我的RNA中会有质粒污染,我打算做荧光定量。因此,提完RNA后需要先用DNase酶处理一下(我用的是Promega的)。有几个问题想请教一下大家:
1.用DNase酶处理的过程中,需不需要加RNA酶抑制剂来防止RNA的降解(试剂盒 ...

你好 你有promega试剂盒提取RNA的步骤吗?求大神解答

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-09-19 14:21:46
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