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dong10zhou

铁虫 (初入文坛)

[求助] 纤维蛋白原跑SDS-PAGE凝胶,急! 已有4人参与

我想用SDS-PAGE凝胶跑纤维蛋白原,不知道跑出来应该是什么样的?我用12%的胶,电压200V,跑出来是两条带?怎么回事?还有条带的颜色很浅,该怎么优化?各种问题急需解决,还请高人指点。。。。

纤维蛋白原跑SDS-PAGE凝胶,急!
Administrator 2014-06-27 09 时 18 分 拷贝.jpg
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长相思

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dong10zhou at 2014-06-28 11:24:39
那两条带颜色浅是怎么回事呀?是染色时间不够吗,我染了一个多小时,脱色时间过夜了。。。。...

不是时间不够吧,你的marker可以了,染的很好啊,是你的蛋白含量不多吧。再你可以在分离胶里面不要加10%SDS再做下。要是只有一条带就可以
未来很美好
8楼2014-06-28 21:21:43
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长相思

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-28 22:57:24
dong10zhou: 金币+1, 有帮助 2014-07-01 17:02:22
两条带很正常啊,蛋白的size不同啊,就看是不是你想看到的KD值罗。还有电压有点高吧,一般我用的是top胶90V,分离胶110V。
未来很美好
2楼2014-06-28 10:32:36
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dong10zhou

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 长相思 at 2014-06-28 10:32:36
两条带很正常啊,蛋白的size不同啊,就看是不是你想看到的KD值罗。还有电压有点高吧,一般我用的是top胶90V,分离胶110V。

那两条带颜色浅是怎么回事呀?是染色时间不够吗,我染了一个多小时,脱色时间过夜了。。。。
3楼2014-06-28 11:24:39
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-06-28 22:57:34
dong10zhou: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-01 17:02:48
1、你的条带还没有跑得很开,为什么不再多跑点时间?
2、根据你的marker可以看出染色与脱色的影响应该不大
3、我们一般浓缩胶80V,分离胶100-120V,如果要跑好点的图,可以用小点的电压
4、样品条带有点弱,可以试试增加上样量
5、如果觉得染色脱色的问题很大,你可以重新配制染色液,一般染个5-10min就可以了,脱色要控制好时间,脱太久条带也会变弱
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
4楼2014-06-28 12:52:50
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