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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 纤维蛋白原跑SDS-PAGE凝胶，急！
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dong10zhou

铁虫 (初入文坛)

[求助] 纤维蛋白原跑SDS-PAGE凝胶，急！ 已有4人参与

我想用SDS-PAGE凝胶跑纤维蛋白原，不知道跑出来应该是什么样的？我用12%的胶，电压200V，跑出来是两条带？怎么回事？还有条带的颜色很浅，该怎么优化？各种问题急需解决，还请高人指点。。。。

纤维蛋白原跑SDS-PAGE凝胶，急！
Administrator 2014-06-27 09 时 18 分 拷贝.jpg
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1楼 2014-06-28 10:14:20
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长相思

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-28 22:57:24
dong10zhou: 金币+1, ★有帮助 2014-07-01 17:02:22
两条带很正常啊，蛋白的size不同啊，就看是不是你想看到的KD值罗。还有电压有点高吧，一般我用的是top胶90V,分离胶110V。
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未来很美好
2楼2014-06-28 10:32:36
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dong10zhou

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 长相思 at 2014-06-28 10:32:36
两条带很正常啊，蛋白的size不同啊，就看是不是你想看到的KD值罗。还有电压有点高吧，一般我用的是top胶90V,分离胶110V。

那两条带颜色浅是怎么回事呀?是染色时间不够吗，我染了一个多小时，脱色时间过夜了。。。。
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3楼2014-06-28 11:24:39
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-06-28 22:57:34
dong10zhou: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-07-01 17:02:48
1、你的条带还没有跑得很开，为什么不再多跑点时间？
2、根据你的marker可以看出染色与脱色的影响应该不大
3、我们一般浓缩胶80V，分离胶100-120V，如果要跑好点的图，可以用小点的电压
4、样品条带有点弱，可以试试增加上样量
5、如果觉得染色脱色的问题很大，你可以重新配制染色液，一般染个5-10min就可以了，脱色要控制好时间，脱太久条带也会变弱
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-06-28 12:52:50
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dong10zhou

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-06-28 12:52:50
1、你的条带还没有跑得很开，为什么不再多跑点时间？
2、根据你的marker可以看出染色与脱色的影响应该不大
3、我们一般浓缩胶80V，分离胶100-120V，如果要跑好点的图，可以用小点的电压
4、样品条带有点弱，可以 ...

原来这样啊，我跑过80、120V的电压，跑的时间很长，才用了200V的电压，跑的时间长了是不是也有影响呢？下次试试小点的电压。。。谢谢你的回答
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5楼2014-06-28 14:10:57
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biology-girl

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-28 22:57:43
dong10zhou: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-07-01 17:04:00
用超滤管浓缩一下，或者加大上样量，煮沸时间久一点，就相当于浓缩了。
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6楼2014-06-28 14:26:19
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dong10zhou at 2014-06-28 14:10:57
原来这样啊，我跑过80、120V的电压，跑的时间很长，才用了200V的电压，跑的时间长了是不是也有影响呢？下次试试小点的电压。。。谢谢你的回答...

跑得时间长的确是不太好，但是我不确定你用200V的电压是否合适，我们用大胶跑也没有用过这么大的电压啊
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-06-28 17:31:52
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长相思

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dong10zhou at 2014-06-28 11:24:39
那两条带颜色浅是怎么回事呀?是染色时间不够吗，我染了一个多小时，脱色时间过夜了。。。。...

不是时间不够吧，你的marker可以了，染的很好啊，是你的蛋白含量不多吧。再你可以在分离胶里面不要加10%SDS再做下。要是只有一条带就可以
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未来很美好
8楼2014-06-28 21:21:43
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55liuyan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
针对分不开的问题，你可以考虑增加胶的浓度，同时减小电压，速度慢一点会分开的更好一些
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每日三省吾身，平静，定气
9楼2014-06-30 12:22:49
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dong10zhou

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 55liuyan at 2014-06-30 12:22:49
针对分不开的问题，你可以考虑增加胶的浓度，同时减小电压，速度慢一点会分开的更好一些

不是应该降低胶的浓度吗？分离大分子的不是应该用低浓度的胶吗》？
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10楼2014-07-01 17:06:28
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