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Kitty564

禁虫 (小有名气)
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1楼 2014-06-25 17:31:21
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luca5s

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2014-06-28 02:16:47
背景高可能是是封闭的时间不够，或者二抗浓度高了，你可以加大点一抗的浓度。-20应该不会降解吧，你可以再做试试，WB是个考验人品的过程，但是要有一定能做出的信念
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咳咳
2楼2014-06-27 07:20:08
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jnu2012

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-02 20:02:23
封闭时间不够，最好是过夜，最少也3个小时
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3楼2014-06-28 00:08:04
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Kitty564

禁虫 (小有名气)
★
wangkaibo123: 金币+1, 鼓励积极交流经验 3q 2014-08-10 15:14:41
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4楼2014-06-30 09:21:42
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Kitty564

禁虫 (小有名气)
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5楼2014-06-30 09:22:54
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luca5s

金虫 (小有名气)
★
wangkaibo123: 金币+1, 鼓励积极交流经验 3q 2014-08-10 15:15:05
引用回帖:
5楼: Originally posted by Kitty564 at 2014-06-30 09:22:54
室温封闭4个小时够吗？你们通常二抗什么比例稀释？...

每个实验室情况不同，我一般37度摇床封闭2h，二抗的话1:7500或8000，但是要是自己感觉高的话可以降啊，膜的话，背景高，可以爆完之后再用pbst或tbst再洗洗，然后再爆，把膜用到极致吧，加油！
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咳咳
6楼2014-06-30 10:08:03
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zhengyuanhui

禁虫 (小有名气)
★
wangkaibo123: 金币+1, 鼓励积极交流经验 3q 2014-08-10 15:15:14
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7楼2014-07-23 16:17:51
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Kitty564

禁虫 (小有名气)
★
wangkaibo123: 金币+1, 鼓励积极交流经验 3q 2014-08-10 15:15:24
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8楼2014-08-02 10:36:02
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Kitty564

禁虫 (小有名气)
★
wangkaibo123: 金币+1, 鼓励积极交流经验 3q 2014-08-10 15:15:34
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9楼2014-08-02 10:43:19
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luca5s

金虫 (小有名气)
★
wangkaibo123: 金币+1, 鼓励积极交流经验 3q 2014-08-10 15:15:42
引用回帖:
9楼: Originally posted by Kitty564 at 2014-08-02 10:43:19
再问一个问题，我的目的蛋白是120KD左右，转膜时marker已转至膜上，内参处marker也转到膜上，一抗4度过夜，二抗4度一个小时，显影时内参正常，本人第一次做时显影结果较好，但后来重复时目的蛋白有时候完全没有，有 ...

很正常，孵育啊加显色液啊不均匀都有可能吧，多注意细节。都是这样的。
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咳咳
10楼2014-08-10 14:28:27
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