应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR引物设计的求助
101/1返回列表
查看: 2386  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

往事F随风

新虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR引物设计的求助 已有3人参与

鄙人新手一枚，很多东西都不懂，所以来 求助了。
PCR引物设计有什么技巧啊？之前也看了很多资料，关于PCR引物设计的原则，比如CG含量在40-60%，温度在58-60,℃为宜等等初步判断PCR一对引物的优劣，但是我们一位师姐建议我们，说PCR引物设计时，一点引物二聚体、错误配对都不要有（我用的primer5.0软件），但是我发现熊掌和鱼往往不能兼得，考虑到CG，温度等，一般设计时会出现二聚体，只是能值还是比较低的（δG<9），或者出现错误配对，如果考虑二聚体等，CG含量一般又比较低。在此我想向大神们请教下，这种情况下，我如何选择呢？是不是在做荧光定量引物时，一点二聚体什么的都不能有？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-22 09:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妳口妳口

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-23 08:25:46
看rating得分，CG实在低就把引物长度加点

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-22 09:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a50044758

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胆子大点，放心去设计吧，有二聚体什么什么的，对试验结果基本上没有影响。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-06-24 14:40:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱上鱼……

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实有时候有二聚和错配，扩增还是可以扩出来，有些真没那么大的讲究。
但是还是选个值好点的扩吧
赞一下 回复此楼
懒病又犯了……
4楼2014-06-24 17:13:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

往事F随风

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 妳口妳口 at 2014-06-22 09:36:04
看rating得分，CG实在低就把引物长度加点

谢谢~
回复此楼
5楼2014-06-24 19:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

往事F随风

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a50044758 at 2014-06-24 14:40:39
胆子大点，放心去设计吧，有二聚体什么什么的，对试验结果基本上没有影响。

好的，谢谢~
回复此楼
6楼2014-06-24 19:13:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

往事F随风

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱上鱼…… at 2014-06-24 17:13:19
其实有时候有二聚和错配，扩增还是可以扩出来，有些真没那么大的讲究。
但是还是选个值好点的扩吧

谢谢指点~
回复此楼
7楼2014-06-24 19:13:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-20 16:54:03
用NCBI的Primer-Blast设计吧，那个给出有一个引物特异性评分，评分低于5的就可以了，设计的时候主要看3‘端是否有相似3个重复，然后GC含量是否超过10% 就可以了  其他的都比较只管，个人比较喜欢用NCBI的Primer-Blast
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
8楼2014-07-20 21:14:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南开豆子

铁虫 (初入文坛)
一般来说要求没那么严格，还有看你的实验目的了，大胆去尝试吧，分子实验有时候很诡异
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-22 17:03:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人偶骑士

铁杆木虫 (正式写手)
可以结合Oligo进行引物分析，问题不是太严重一般都可以跑出来
赞一下 回复此楼
道之所在，虽千万人吾往矣！
10楼2014-08-20 15:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 往事F随风 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-01 05:48 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-01 05:48 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 05:41 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 05:17 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 3/150 2026-11-01 04:04 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 04:04 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 03:56 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 03:51 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 03:51 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 03:46 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 16/800 2026-11-01 03:38 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 20/1000 2026-11-01 03:30 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 02:19 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-11-01 00:41 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 12/600 2026-11-01 00:15 by YXM1FDCSE8Bn
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 13/650 2026-10-31 17:12 by hKe7U1kad5Sg
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +8 zuesli 2026-10-27 14/700 2026-10-30 22:44 by 好运连连公主
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭