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关于PCR引物设计的求助已有3人参与
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鄙人新手一枚,很多东西都不懂,所以来 求助了。 PCR引物设计有什么技巧啊?之前也看了很多资料,关于PCR引物设计的原则,比如CG含量在40-60%,温度在58-60,℃为宜等等初步判断PCR一对引物的优劣,但是我们一位师姐建议我们,说PCR引物设计时,一点引物二聚体、错误配对都不要有(我用的primer5.0软件),但是我发现熊掌和鱼往往不能兼得,考虑到CG,温度等,一般设计时会出现二聚体,只是能值还是比较低的(δG<9),或者出现错误配对,如果考虑二聚体等,CG含量一般又比较低。在此我想向大神们请教下,这种情况下,我如何选择呢?是不是在做荧光定量引物时,一点二聚体什么的都不能有? |
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