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关于PCR引物设计的求助 已有3人参与
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鄙人新手一枚，很多东西都不懂，所以来 求助了。 PCR引物设计有什么技巧啊？之前也看了很多资料，关于PCR引物设计的原则，比如CG含量在40-60%，温度在58-60,℃为宜等等初步判断PCR一对引物的优劣，但是我们一位师姐建议我们，说PCR引物设计时，一点引物二聚体、错误配对都不要有（我用的primer5.0软件），但是我发现熊掌和鱼往往不能兼得，考虑到CG，温度等，一般设计时会出现二聚体，只是能值还是比较低的（δG<9），或者出现错误配对，如果考虑二聚体等，CG含量一般又比较低。在此我想向大神们请教下，这种情况下，我如何选择呢？是不是在做荧光定量引物时，一点二聚体什么的都不能有？ |
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