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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR引物设计的求助
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往事F随风

新虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR引物设计的求助 已有3人参与

鄙人新手一枚，很多东西都不懂，所以来 求助了。
PCR引物设计有什么技巧啊？之前也看了很多资料，关于PCR引物设计的原则，比如CG含量在40-60%，温度在58-60,℃为宜等等初步判断PCR一对引物的优劣，但是我们一位师姐建议我们，说PCR引物设计时，一点引物二聚体、错误配对都不要有（我用的primer5.0软件），但是我发现熊掌和鱼往往不能兼得，考虑到CG，温度等，一般设计时会出现二聚体，只是能值还是比较低的（δG<9），或者出现错误配对，如果考虑二聚体等，CG含量一般又比较低。在此我想向大神们请教下，这种情况下，我如何选择呢？是不是在做荧光定量引物时，一点二聚体什么的都不能有？
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1楼 2014-06-22 09:23:10
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人偶骑士

铁杆木虫 (正式写手)
可以结合Oligo进行引物分析，问题不是太严重一般都可以跑出来
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道之所在，虽千万人吾往矣！
10楼2014-08-20 15:21:31
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妳口妳口

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-06-23 08:25:46
看rating得分，CG实在低就把引物长度加点

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-22 09:36:04
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a50044758

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胆子大点，放心去设计吧，有二聚体什么什么的，对试验结果基本上没有影响。
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3楼2014-06-24 14:40:39
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爱上鱼……

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实有时候有二聚和错配，扩增还是可以扩出来，有些真没那么大的讲究。
但是还是选个值好点的扩吧
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懒病又犯了……
4楼2014-06-24 17:13:19
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