应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何获得含有内含子基因的完整cDNA序列？
51/1返回列表
查看: 2987  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhaoxinrui0511

金虫 (小有名气)

[求助] 如何获得含有内含子基因的完整cDNA序列？ 已有4人参与

我要扩增的是一个黑曲霉基因（含有两段内含子）的cDNA序列，基因结构是这样的：
1-186是外显子（186 bp）
187-232是内含子
233-313是外显子（81 bp）
314-362是内含子
363-1583是外显子（1221 bp）
之前尝试了分别用PCR扩增三段外显子，再用融合PCR的方法连接，但由于前两个外显子片段太短而失败了，
请问有其他什么好办法吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-22 02:07:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoxinrui0511

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-06-22 12:23:29
搞不懂你到底要不要内含子。不要内含子直接用mRNA做RT，如果要内含子直接从基因组DNA中PCR。

我想要得到的是不含内含子的基因序列，除了RT之外还有其他的方法吗？
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-22 16:05:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

lone007

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-06-22 11:32:34
zhaoxinrui0511: 金币+2, ★★★很有帮助, 不好意思，可能是我没表述清楚，我需要的是没有内含子的基因序列，除了RT之外，还有其他的方法吗 2014-06-22 16:08:03
cDNA的定义是：以成熟mRNA为模板在逆转录酶的作用下合成DNA单链，之后在DNA聚合酶的作用下合成的双链DNA。成熟的mRNA是不含有内含子的，因此，cDNA可以视为是基因组全部外显子的集合，无论你怎么扩都不会包含内含子。
赞一下(1人) 回复此楼
做一个合格的普通人
2楼2014-06-22 08:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaoxinrui0511(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-22 12:30:23
zhaoxinrui0511: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-22 16:03:48
扩增cDNA要提RNA，逆转录后的产物做模版。要是嫌麻烦，就叫核酸合成公司合成吧，很快的。
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-22 09:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

这是马甲

至尊木虫 (著名写手)

谁的马甲都不是
含内含子的cDNA~~~
赞一下(1人) 回复此楼
这是一只什么都不懂的马甲~~~
4楼2014-06-22 09:56:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 0703化学调剂 +3 18889395102 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:53 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 mxcz321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭