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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 仍然是3‘RACE问题
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 仍然是3‘RACE问题 已有1人参与

用的Clontech 的RACE试剂盒 RNA 提的真的很好没问题不论浓度测量还是电泳图都不错  然后用保守区设计的一对引物PCR获得的片段200bp测序回来也是我要的基因序列  证明表达量也没有问题是可以P出来的 但是应用基因特异性引物和UPM（接头引物）进行PCR 获得的单一条带居然不是 我要基因序列  求分析！！！！
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1楼 2014-06-06 17:01:18
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这再正常不过了，脱靶啦

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2楼2014-06-06 17:25:29
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-06 17:25:29
这再正常不过了，脱靶啦

对啊 ！！！！那该怎么办呢 而且测序回来的序列没有POLY A .....请教您！！！帮我想想办法！
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3楼2014-06-14 08:57:07
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2014-06-14 08:57:07
对啊 ！！！！那该怎么办呢 而且测序回来的序列没有POLY A .....请教您！！！帮我想想办法！...

特异引物没选好，容易脱靶，退火温度设高点

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4楼2014-06-14 09:06:30
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-14 09:06:30
特异引物没选好，容易脱靶，退火温度设高点
...

那没有polyA是怎么回事呢？
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5楼2014-06-14 09:33:57
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yoyo单眼皮: 金币+10 2014-07-06 13:14:29
引用回帖:
5楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2014-06-14 09:33:57
那没有polyA是怎么回事呢？...

很明显的脱靶啦，重新设计引物

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6楼2014-06-14 10:24:56
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