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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 基因敲除问题
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因敲除问题 已有2人参与

使用bar基因，用同源重组方法敲除一个真菌的基因，农杆菌介导后挑取了大量菌落提取DNA逐个进行PCR检验。
使用bar基因能扩出，但是使用原基因引物扩增出来的依然是以前的长度，bar基因并没有交换进去。想知道是实验失败了？还是只是没挑到转化子而已？
另外bar基因为什么能扩出？插入到哪里去了？
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1楼 2014-06-03 20:55:40
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mochenmi(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-04 08:22:52
bar基因随机整合在基因组其他区域上的可能性最大。。。。
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大家相互帮助哈
2楼2014-06-03 23:44:53
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-03 23:44:53
bar基因随机整合在基因组其他区域上的可能性最大。。。。

那实验操作还是没问题吧？  只是没挑到转化子而已？
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3楼2014-06-06 10:41:33
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-03 23:44:53
bar基因随机整合在基因组其他区域上的可能性最大。。。。

另外bar基因不会连同两边的同源臂一起随机插入嘛？
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4楼2014-06-06 10:43:51
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luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mochenmi at 2014-06-06 10:43:51
另外bar基因不会连同两边的同源臂一起随机插入嘛？...

都是有概率的，基因完全可能从中间交换
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大家相互帮助哈
5楼2014-06-06 22:52:38
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bioseeker

木虫 (小有名气)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-25 08:28:41
随机整合进去了。可以设计同源臂外端引物，配合bar基因内部引物，看看能不能扩出来。但按照你的实验结果，应该是没有晒到转化子，都是随机整合。
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6楼2014-06-24 23:14:27
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xinonghuyang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

发生了随机插入，没有进行同源重组。
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7楼2014-07-17 09:55:11
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