| 查看: 2458 | 回复: 10 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
zhumeidong木虫 (小有名气)
|
[求助]
请问细胞膜蛋白怎么提取，目的蛋白分子量170kD 已有3人参与
|
|||
| 请问细胞膜蛋白怎么提取，目的蛋白分子量170kD，实验室有Roche的complete EDTA-free蛋白酶抑制剂04 693 132 001能用上吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有69人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有11人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有23人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有7人回复
-
filecode
已经有12人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有13人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有7人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有13人回复
-
各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。
已经有8人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有22人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白SDSPAGE电泳遇到分子量漂移，变大30多kDa!
已经有10人回复
- 请教140KD蛋白的转膜条件
已经有20人回复
- P糖蛋白的western blot条件
已经有5人回复
- 分子量13KDa的蛋白的转膜条件？
已经有6人回复
- 关于western相关试剂材料的选择（转）
已经有7人回复
- 如何提取细胞膜蛋白和细胞器蛋白
已经有3人回复
- western实验中大分子量的蛋白如何鉴定
已经有5人回复
- 我的绿色荧光蛋白应该在细胞膜上有 怎么整张图片都是全都是绿色的呢
已经有6人回复
- 蛋白表达分子量偏大
已经有25人回复
- 哪可以买到大分子量的蛋白marker？
已经有5人回复
- 原核表达蛋白分子量大小
已经有13人回复
- 关于质谱测定蛋白质分子量的图谱分析
已经有19人回复
- 关于预测蛋白质分子量、二级结构
已经有6人回复
- 蛋白分离，Sephadex分子量的选择
已经有6人回复
- 胶原蛋白分子量的确定
已经有4人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- SDS-PAGE 电泳蛋白分子量飘移
已经有12人回复
- 大家见到过毕赤酵母表达出的外源蛋白分子量比实际分子量小吗，而且还有活性？
已经有20人回复
- 【求助/交流】如何测定蛋白质的分子量大小？
已经有11人回复
- 【求助/交流】哪位高人知道去哪里查某一蛋白质的分子量是多少KDa？
已经有7人回复
- 【求助/交流】小分子量蛋白电泳问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大
已经有17人回复
- 【求助/交流】求助蛋白分子量
已经有7人回复
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- BioEPI: 2
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17445.7
- 散金: 1682
- 红花: 121
- 沙发: 42
- 帖子: 14594
- 在线: 2201.3小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
10楼2014-05-30 18:46:27
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
-
专家经验: +140 - 应助: 308 (大学生)
- 金币: 1099.5
- 散金: 8294
- 红花: 65
- 沙发: 5
- 帖子: 1996
- 在线: 266.1小时
- 虫号: 3188421
- 注册: 2014-05-07
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-29 22:19:52
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-29 22:19:52
|
普通的Triton-x114就可以了把，下面有一个很简单的protocol NRC Institute for Biological Sciences Triton X-114 extraction protocol (Hydrophobic protein preparation) Ressuspend cells in Solution A (dil 1/8) and add 15 μl of mammalian cocktail proteases inhibitor (Sigma). Add 1 third of the volume of solution B Incubate on ice for 1 hour with frequent vortexing. Centrifuge at 10 000g for 10 minutes at 4°C to pellet unbroken cells and nuclei. Transfer supernatant in clean eppendorfs then incubate at 30°C for 3 minutes (until sln is cloudy). Centrifuge at 1 300g for 10 minutes at room temperature. Transfer Aqueous phase in new eppendorf (but keep detergent phase at room temperature). Add X volume of triton X-114 to Aqueous phase: Vol of Aq phase = X vol of triton X-114 24.6 Shake well then incubate 3 minutes at 30°C (until cloudy) then transfer on top of detergent phase slowly. Centrifuge at 1 300g for 10 minutes at room temperature. Remove Aqueous phase with pipette down to detergent interphase. Precipitate hydrophobic protein (detergent phase) with 10X volume of acetone. Place overnight at -20°C. Pellet proteins by centrifugation at max speed for 10 minutes at 4°C. Ressuspend proteins in IEF sln (7M urea, 2M thiourea, 4% CHAPS, 1% DTT) then precipitate protein again with 10 volume of acetone. Place 5-10 min at -20°C. Pellet proteins by centrifugation at max speed for 10 minutes at 4°C. Air dry pellet then dissolve protein in IEF solution Solution: Solution A: 80 mM Tris-HCl, pH 7.4 ; 1,2M NaCl 0,63 g Tris-HCl 3,51 g NaCl Dissolve in 30 ml of water Adjust pH to 7.4 Adjust volume to 50 ml with water Solution B: 40 mM Tris-HCl, pH 7.4 ; 600 mM NaCl ; 4% triton X-114 5 ml of sln A Add triton to have a final concentration off 4% 4% x 10 ml = ml [triton X114] Adjust volume to 10 ml with water 只有英文的，没中文的。 |
2楼2014-05-29 21:43:00
zhumeidong
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4156.3
- 帖子: 93
- 在线: 78.7小时
- 虫号: 1898572
- 注册: 2012-07-18
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
3楼2014-05-29 22:18:57
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
-
专家经验: +140 - 应助: 308 (大学生)
- 金币: 1099.5
- 散金: 8294
- 红花: 65
- 沙发: 5
- 帖子: 1996
- 在线: 266.1小时
- 虫号: 3188421
- 注册: 2014-05-07
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
4楼2014-05-29 22:21:59
