应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染不显示带
51/1返回列表
查看: 4033  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

[求助] DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染不显示带 已有3人参与

最近再做分子标记，由于水平胶跑不出条带，就改用垂直胶来跑。用银染法显色。之前做过几次染色还算成功，之后再做就效果不好，根据文献改动了显影方法，可是最近几天跑胶染色的结果是全部白板，连Marker都染不出来。之前的方法：乙醇固定，漂洗，硝酸浸泡，漂洗，硝酸银染色，漂洗，加甲醛的碳酸钠显影；现在把硝酸浸泡这一步省去了，加甲醛的碳酸钠显影，硝酸银染色时间从20mins加至30分钟，漂洗变为一次，但是最近连Marker也无法染出来。有时候只有一块板有显影，其它几块都不显，不知道哪里出了问题，求指导。如果是PCR的问题，为什么Marker也染不出；如果是染色的问题，为什么有时候能部分染色？还有就是硝酸浸泡是什么作用！万分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我努力，我坚持，我成功！
1楼 2014-05-27 16:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 16:45:29
分子标记不用垂直胶吧，水平胶如果不出来，问题就可能涉及以下几个方面：
1 DNA降解厉害
2 分子标记的引物出现问题
3 分子标记PCR体系不对
4 分子标记时PCR退火温度过高或过低

建议：做一个touchdown PCR ， ...

谢谢您的帮助！我想问一下，您说的DNA降解的严重是指模板还是扩增产物呢？第二，据我了解SSR，SRAP，AFLP等分子标记也是用PAGE胶跑的啊！还有就是我扩增的产物在琼脂糖胶跑的不好，不怎么显，所以改用PAGE胶。我最困惑的是同样的条件之前还能扩增的不错，染色也挺好，第二天再做就效果很差，显不出什么东西来，求指导！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
我努力，我坚持，我成功！
4楼2014-05-27 20:21:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 18:51:27
分子标记不用垂直胶吧，水平胶如果不出来，问题就可能涉及以下几个方面：
1 DNA降解厉害
2 分子标记的引物出现问题
3 分子标记PCR体系不对
4 分子标记时PCR退火温度过高或过低

建议：做一个touchdown PCR ， 感觉不是PAGE试验的问题
谢谢！
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-05-27 16:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人
引用回帖:
4楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2014-05-27 20:21:59
谢谢您的帮助！我想问一下，您说的DNA降解的严重是指模板还是扩增产物呢？第二，据我了解SSR，SRAP，AFLP等分子标记也是用PAGE胶跑的啊！还有就是我扩增的产物在琼脂糖胶跑的不好，不怎么显，所以改用PAGE胶。我最 ...

1 降解指的就是模板
2 分子标记的重现性特别差，我用的是SSR和SRAP，基本用琼脂糖就好，最好是EB染色，PAGE多麻烦啊
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
5楼2014-05-27 20:28:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-05-27 20:28:32
1 降解指的就是模板
2 分子标记的重现性特别差，我用的是SSR和SRAP，基本用琼脂糖就好，最好是EB染色，PAGE多麻烦啊...

EB我们没用，我们的琼脂糖胶用Goldview.我想问一下当时你们做水平电泳的时候上样量一般是多少啊？还有如果用PAGE 胶，那么银染的时候用硝酸处理么？谢谢
赞一下 回复此楼
我努力，我坚持，我成功！
6楼2014-05-28 15:33:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 +4 pupcoco 2026-03-17 7/350 2026-03-18 12:14 by djl2006
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 070300化学319求调剂 +5 锦鲤0909 2026-03-17 5/250 2026-03-18 10:21 by macy2011
[考研] 302求调剂 +9 呼呼呼。。。。 2026-03-17 9/450 2026-03-18 09:34 by zhukairuo
[考博] 26申博 +4 八旬速览 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭