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谢伊莹木虫 (正式写手)
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[求助]
假单胞菌测脂肪酶酶活
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培养基：葡萄糖 10 g，蛋白胨 10 g，K2HPO4 1 g，MgSO4 2 g，NaCl 2g，水 1L，pH7.5，121 ℃高压灭菌 20 min 培养条件：25度 4天 酶活测定：取 pNPP（称取棕榈酸对硝基苯酯 (4-Nitrophenyl palmitate, pNPP) 0.030 g，加入 10 mL 异丙醇超声溶解） 溶液 2 mL，底物缓冲液 18 mL【取 A 液 （0.2 mol/l NaH2PO4溶液）5.3 mL， B 液 （0.2 mol/l Na2HPO4）94.7 mL，混合后加入约 280 mL 水，加入 0.92 g 脱氧胆酸钠，0.44 g 阿拉 伯树胶粉，搅拌溶解，用 H3PO4或 NaOH 调节 pH 值至 8.0，定容至 400 mL, 4℃保存】，混合。6 只试管中分别加入上述混合液 2.4 mL，37℃预热3 min。其中3只试管中加入100 uL样品溶液，另外3只试管中加入100 uL经煮沸变性 (100℃，5 min)的样品溶液作为对照，振荡混匀；在 37℃水浴锅内反应 15 min，立即加入 95% 乙醇 2 mL终止反应。7,000 rpm 离心 2 min。分光光度计以蒸馏水调零，上清液在 410 nm 波长处测定对照(A0)和样品溶液(A)的吸光值，A-A0为实测吸光值。用直线回归方程计算脂肪酶的活力。 问题：底物缓冲液稍浑浊，超声后不变化，底物缓冲液和底物混合后明显变浑浊，超声后无变化，对么 底物缓冲液与95%乙醇混合后有絮状物出现，对么 目前我的酶活在百分位，时而还有负值出现，求赐教~ |
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