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qingling1100

新虫 (小有名气)

[求助] 关于脂肪氧合酶测定的问题

各位虫友:我在实验中需要测定样品中的脂肪氧合酶活力,测定方法:200 μL亚油酸钠底物与2.9 mL、50 mM的柠檬酸缓冲溶液 (pH5.5)混合,于20 ℃水浴中使其温度快速均匀,待其在234 nm处的吸光值稳定后,加入0.1mL酶提取液,迅速混合均匀于20 ℃、234 nm处测其1 min内吸光度的增加量。1个酶活性单位定义为每分钟每克酶蛋白质吸光度增加1。
       操作过程中发现酶粗提液颜色比较浑浊,12000G离心两次,每次30分钟,还是浑浊的酶液。测定酶活的时候发现A234的变化没有规律,高一下低一下,不知道是怎么回事?
       请高手指教啊,是不是我酶液不够澄清会影响测定结果?我测定酶活用的是PH5.5的磷酸缓冲液,大家在做的时候有没有类似的情况出现?
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user59888

金虫 (文坛精英)

宫创始人 ------小妮

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qingling1100: 金币+1, 有帮助 2013-04-19 19:08:44
分光光度法测定体系不能有浊度的限制,不适用于浊度较高的粗酶液酶活力的测定,比如未脱脂的大豆提取液.你可以采用量压法、KI2淀粉法测定了一系列经不同程度热处理的脂肪氧合酶酶活力.
此人已死,没烧纸的半夜出来喝酒
2楼2013-04-19 18:20:49
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我吃红烧肉

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
qingling1100: 金币+4 2013-05-22 15:09:04
太浑浊,不适宜用分光光度计测定。如果样品不易离心的话,在低温环境下过滤,就可以得到清晰的粗酶液。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
------果蔬保鲜----双孢菇------
3楼2013-05-21 15:58:11
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我吃红烧肉

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有,你测定时间1min有点短,最好3min。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
------果蔬保鲜----双孢菇------
4楼2013-05-21 16:00:51
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56311660

金虫 (小有名气)

这个回复真是好。解决了我的问题
资料共享!
5楼2021-12-18 12:03:16
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