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qingling1100新虫 (小有名气)
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关于脂肪氧合酶测定的问题
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各位虫友：我在实验中需要测定样品中的脂肪氧合酶活力，测定方法：200 μL亚油酸钠底物与2.9 mL、50 mM的柠檬酸缓冲溶液 (pH5.5)混合，于20 ℃水浴中使其温度快速均匀，待其在234 nm处的吸光值稳定后，加入0.1mL酶提取液，迅速混合均匀于20 ℃、234 nm处测其1 min内吸光度的增加量。1个酶活性单位定义为每分钟每克酶蛋白质吸光度增加1。 操作过程中发现酶粗提液颜色比较浑浊，12000G离心两次，每次30分钟，还是浑浊的酶液。测定酶活的时候发现A234的变化没有规律，高一下低一下，不知道是怎么回事？ 请高手指教啊，是不是我酶液不够澄清会影响测定结果？我测定酶活用的是PH5.5的磷酸缓冲液，大家在做的时候有没有类似的情况出现? |
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