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苏舒smile

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[求助] 关于脂肪氧合酶底物亚油酸的制备

我现在在做肉制品的脂肪氧合酶我的方法是
   底物液准备:140mg亚油酸溶于5ml含有180ul的吐温20(Twen20)脱氧重蒸水中，该溶液用2N的NaOH调节pH在9.0到亚油酸完全溶解并且pH保持稳定。然后用脱氧重蒸水定容到50ml。
   活力测定:200μl亚油酸钠底物与2.9ml  pH为5.5的柠檬酸缓冲溶液混合，于20℃水浴中使其温度快速均匀，待其在234nm处的吸光值稳定后，加入0.lml酶液，迅速混合均匀于20℃、234nm处测其l min内吸光度的增加量。1个酶活力单位表示为每分钟每克蛋白质吸光度增加1。

求各位高手指点下，我的亚油酸买回来时液体的，我怎么取1400MG呢？我的底物定容后PH为什么在11左右，我怎么调回到9.0 呢？  最后酶活的计算方法。
   请大家指点下脱氧重蒸水的制备方法

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1楼2012-11-24 23:15:28

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shiliujuan

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我做与大豆LOX相关的实验，我的亚油酸也是液体，但是方法里面取的就是mL。或许你可以查下亚油酸的密度，计算下需要的体积。
底物最后pH不是9，可能是NaOH加得太多，调pH用盐酸。
为什么你的酶活定义里面有蛋白质？我的酶活单位定义是30℃、pH9.0下以亚油酸为底物的3mL反应体系在234nm处每分钟增加0.001吸光度为一个单位，实验时取了1.5mL底物，所以计算公式是：吸光度增加值X1000X2X酶的稀释倍数/（反应时间X酶的体积），得出酶活是u/mL表示。我的底物和你的配置方法不同，所以我的公式仅供参考。
我的实验没有用脱氧水，所以结果会不准确。但是据说制备有点麻烦。
希望对你有所帮助。
我也有个疑问，你的亚油酸加的量挺多的，你买的是什么样的亚油酸，纯度多少？99%的亚油酸还是很贵的，纯度低了又怕影响实验结果。有问题可以一起讨论。

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2楼2012-11-25 11:07:08

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苏舒smile

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引用回帖:

2楼: Originally posted by shiliujuan at 2012-11-25 11:07:08
我做与大豆LOX相关的实验，我的亚油酸也是液体，但是方法里面取的就是mL。或许你可以查下亚油酸的密度，计算下需要的体积。
底物最后pH不是9，可能是NaOH加得太多，调pH用盐酸。
为什么你的酶活定义里面有蛋白质？ ...

我买的是sigma的，>99%

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3楼2012-11-25 16:06:52

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