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关于脂肪氧合酶底物亚油酸的制备
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我现在在做肉制品的脂肪氧合酶 我的方法是 底物液准备:140mg亚油酸溶于5ml含有180ul的吐温20(Twen20)脱氧重蒸水中，该溶液用2N的NaOH调节pH在9.0到亚油酸完全溶解并且pH保持稳定。然后用脱氧重蒸水定容到50ml。 活力测定:200μl亚油酸钠底物与2.9ml pH为5.5的柠檬酸缓冲溶液混合，于20℃水浴中使其温度快速均匀，待其在234nm处的吸光值稳定后，加入0.lml酶液，迅速混合均匀于20℃、234nm处测其l min内吸光度的增加量。1个酶活力单位表示为每分钟每克蛋白质吸光度增加1。 求各位高手指点下，我的亚油酸买回来时液体的，我怎么取1400MG呢？ 我的底物定容后PH为什么在11左右，我怎么调回到9.0 呢？ 最后酶活的计算方法。 请大家指点下脱氧重蒸水的制备方法 |
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shiliujuan
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4楼2012-11-25 16:55:25
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【答案】应助回帖
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我做与大豆LOX相关的实验，我的亚油酸也是液体，但是方法里面取的就是mL。或许你可以查下亚油酸的密度，计算下需要的体积。 底物最后pH不是9，可能是NaOH加得太多，调pH用盐酸。 为什么你的酶活定义里面有蛋白质？我的酶活单位定义是30℃、pH9.0下以亚油酸为底物的3mL反应体系在234nm处每分钟增加0.001吸光度为一个单位，实验时取了1.5mL底物，所以计算公式是：吸光度增加值X1000X2X酶的稀释倍数/（反应时间X酶的体积），得出酶活是u/mL表示。我的底物和你的配置方法不同，所以我的公式仅供参考。 我的实验没有用脱氧水，所以结果会不准确。但是据说制备有点麻烦。 希望对你有所帮助。 我也有个疑问，你的亚油酸加的量挺多的，你买的是什么样的亚油酸，纯度多少？99%的亚油酸还是很贵的，纯度低了又怕影响实验结果。有问题可以一起讨论。 |
2楼2012-11-25 11:07:08
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lihaitao321
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