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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 丙二醛MDA的测定问题
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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] 丙二醛MDA的测定问题

丙二醛MDA测定找到两种方法但不知道哪种合适，请高手给看看：
第一种：
（一）试剂配制
20%TCA：100g 三氯乙酸  →  500mL
0.67%TBA：3.35g硫代巴比妥酸  →  500ml 20%TCA （避光）
(二)丙二醛比活力的测定
0.5ml酶液（对照用0.5ml的0.05mol/L pH=7.8的磷酸缓冲液代替酶液）+ 3mlTBA―振荡―沸水浴上反应30min―冷却（至少30min）离心（10000rpm,10min）―比色（OD600、OD532、OD450）。
第二种：
1、试剂配制：
10%TCA：100g 三氯乙酸  →  1L
0.67%TBA：3.35g硫代巴比妥酸  →  500ml 10%TCA （避光）
2、测定步骤:
0.2 样品+1.6ml 10%TCA 研磨→12000g 离心 10min →上清1.5ml +1.5 0.67% TBA →沸水煮30min →冷却，离心→上清OD450，OD532，OD600

这两种方法基本一样，但区别就在于样品需不需要加TCA来研磨？如果不需要加TCA这样测定所用的酶液和测SOD、CAT的一样了可以省下不少时间，如果需要加入TCA研磨来制酶液就要全部重新研磨很费时间，请高手给说说样品到底需不需要加TCA研磨？为什么？
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
1楼2012-08-14 15:21:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
SongQ5285: 金币+3, APEPI+1, 你的讨论总是那么有学术性，学习 2012-08-14 17:24:57
a71840584: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-08-25 10:18:26
内容已删除
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2012-08-14 17:01:25
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普通回帖

litingwen

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要加TCA，这是蛋白质的变性剂，会有吸收峰干扰。
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2楼2012-08-14 16:09:15
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lnwtx

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要加TCA，使蛋白质变性。否则测定不准。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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为了IF，努力向前冲！哈哈哈哈！
4楼2012-08-17 09:30:29
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樱花雨guo

新虫 (初入文坛)
请问 用TCA提取 空白管是TCA+TBA吗
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5楼2014-08-08 00:30:39
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让梦想见鬼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-14 17:01:25
楼主提的问题很好，以前我也发现过这个差异，但只是以多数英文文献报道为准，采取TCA研磨法，并没有深入思考。

在植物体内MDA一方面由膜脂过氧化产生，另一方面，脂肪氧化酶还在不断催化其他反应也可能产生MDA。 ...

你好！我做的是玉米幼苗实验，用的是楼主第二种方法，但是MDA含量总是出现先降后升，我想问问是怎么回事？
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6楼2015-09-07 19:20:35
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我是王大锤

新虫 (初入文坛)
我想测定植物样中的丙二醛，但是可以长期保存后再测吗？长时间保存测定结果准？
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7楼2016-03-16 16:08:13
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张旭000

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-14 17:01:25
楼主提的问题很好，以前我也发现过这个差异，但只是以多数英文文献报道为准，采取TCA研磨法，并没有深入思考。

在植物体内MDA一方面由膜脂过氧化产生，另一方面，脂肪氧化酶还在不断催化其他反应也可能产生MDA。 ...

能不能问一下，丙二醛前体物1，1，3，3-四乙氧基丙烷和1，1，3，3-四甲氧基丙烷有什莫区别吗
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8楼2019-08-02 21:25:49
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张旭000

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by litingwen at 2012-08-14 16:09:15
需要加TCA，这是蛋白质的变性剂，会有吸收峰干扰。

TCA是不是也可以溶解丙二醛啊，我看一些文献用TCA提取
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9楼2019-08-02 21:27:03
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