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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] 丙二醛MDA的测定问题

丙二醛MDA测定找到两种方法但不知道哪种合适，请高手给看看：
第一种：
（一）试剂配制
20%TCA：100g 三氯乙酸  →  500mL
0.67%TBA：3.35g硫代巴比妥酸  →  500ml 20%TCA （避光）
(二)丙二醛比活力的测定
0.5ml酶液（对照用0.5ml的0.05mol/L pH=7.8的磷酸缓冲液代替酶液）+ 3mlTBA―振荡―沸水浴上反应30min―冷却（至少30min）离心（10000rpm,10min）―比色（OD600、OD532、OD450）。
第二种：
1、试剂配制：
10%TCA：100g 三氯乙酸  →  1L
0.67%TBA：3.35g硫代巴比妥酸  →  500ml 10%TCA （避光）
2、测定步骤:
0.2 样品+1.6ml 10%TCA 研磨→12000g 离心 10min →上清1.5ml +1.5 0.67% TBA →沸水煮30min →冷却，离心→上清OD450，OD532，OD600

这两种方法基本一样，但区别就在于样品需不需要加TCA来研磨？如果不需要加TCA这样测定所用的酶液和测SOD、CAT的一样了可以省下不少时间，如果需要加入TCA研磨来制酶液就要全部重新研磨很费时间，请高手给说说样品到底需不需要加TCA研磨？为什么？
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
1楼2012-08-14 15:21:01
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张旭000

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by litingwen at 2012-08-14 16:09:15
需要加TCA，这是蛋白质的变性剂，会有吸收峰干扰。

TCA是不是也可以溶解丙二醛啊，我看一些文献用TCA提取
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9楼2019-08-02 21:27:03
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litingwen

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要加TCA，这是蛋白质的变性剂，会有吸收峰干扰。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-08-14 16:09:15
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lnwtx

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要加TCA，使蛋白质变性。否则测定不准。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
为了IF，努力向前冲！哈哈哈哈！
4楼2012-08-17 09:30:29
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樱花雨guo

新虫 (初入文坛)
请问 用TCA提取 空白管是TCA+TBA吗
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-08-08 00:30:39
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