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sonhey金虫 (小有名气)
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[求助]
关于去磷酸酶加入时间已有2人参与
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| 请问去磷酸酶的加入实在酶切时间加入还是酶切完成以后再加入，我做的是酶切时间加入的，但是自连效率还是挺高的。刚才我看了一下还有一个去磷酸化酶的buffer，所以我有的纠结，不知道什么时间加入。希望虫友帮助，小弟是初入实验室，还请帮助，谢谢!!! |
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biostar2009
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-25 20:14:01
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| 这种问题充分取决于你用的哪个公司的酶，一般而言，大多数公司都会给出一个分子生物学常用酶在这些常用酶buffer里面的活性，也就是buffer通用性。以fermentas的FastAP为例，这个酶几乎在所有的常用酶buffer里面均有100%活性，所以根本没有必要在酶切之后还要去纯化再加，直接加进去就可以了。当然，考虑到酶一般含有50%的甘油，在一些对甘油浓度敏感的内切酶中，还需要考虑加入对甘油浓度的影响，这种情况下一般放大一点点体积就可以解决了。 |
3楼2014-05-25 19:15:17
Neo2000
木虫 (著名写手)
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2楼2014-05-25 19:12:14