| 查看: 1662 | 回复: 2 | ||||
sonhey金虫 (小有名气)
|
[求助]
关于去磷酸酶加入时间 已有2人参与
|
| 请问去磷酸酶的加入实在酶切时间加入还是酶切完成以后再加入，我做的是酶切时间加入的，但是自连效率还是挺高的。刚才我看了一下还有一个去磷酸化酶的buffer，所以我有的纠结，不知道什么时间加入。希望虫友帮助，小弟是初入实验室，还请帮助，谢谢!!! |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有什么好方法除掉体制中的磷酸
已经有4人回复
- 单酶切后的载体和目的片段是否都需要去磷酸化
已经有4人回复
- 载体去磷酸化后的回收问题
已经有21人回复
- 土壤磷酸酶活性测定遇到问题急需求解？？
已经有24人回复
- 求助能使活细胞内碱性磷酸酶升高或降低的诱导剂或抑制剂
已经有16人回复
- 测定土壤酸性磷酸酶不显色，求各位高人指点一二
已经有4人回复
- 关于基因重组过程中的去磷酸化和连接
已经有4人回复
- 肝功能十二项中碱性磷酸酶偏高，白蛋白偏高是怎么回事
已经有3人回复
- 平末端连接做不出来克隆
已经有30人回复
- 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？
已经有5人回复
- 碱性磷酸酶的检测
已经有17人回复
- 有谁试过双酶切的同时加碱性磷酸酶
已经有4人回复
- WB检测磷酸化蛋白
已经有41人回复
- 去磷酸化试剂盒
已经有8人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 【求助】有人在做焦磷酸测序么？希望得到大虾的帮助
已经有13人回复
- 【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】5-RACE问题
已经有14人回复
- 【求助】土壤酸性磷酸酶
已经有13人回复
- 【求助/交流】单酶切载体竟然没切开，寻求原因？？
已经有15人回复
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-05-25 19:12:14
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10435.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-25 20:14:01
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-25 20:14:01
| 这种问题充分取决于你用的哪个公司的酶，一般而言，大多数公司都会给出一个分子生物学常用酶在这些常用酶buffer里面的活性，也就是buffer通用性。以fermentas的FastAP为例，这个酶几乎在所有的常用酶buffer里面均有100%活性，所以根本没有必要在酶切之后还要去纯化再加，直接加进去就可以了。当然，考虑到酶一般含有50%的甘油，在一些对甘油浓度敏感的内切酶中，还需要考虑加入对甘油浓度的影响，这种情况下一般放大一点点体积就可以解决了。 |
3楼2014-05-25 19:15:17
