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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白诱导表达的蛋白片段比目的蛋白小了一倍，怎么回事？
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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达的蛋白片段比目的蛋白小了一倍，怎么回事？ 已有4人参与

最近在做诱导蛋白表达，预期蛋白大小78kd左右，尝试了一些温度，IPTG浓度也设了梯度，时间也有延长，在oD值在0.6-0.8时开始诱导，结果都没有诱导出来，室温诱导过夜后，在34kd处条带粗，但是与所要蛋白小了大概一半，不知是怎么回事？恳请大家帮忙分析一下原因，急啊
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1楼 2014-05-24 09:56:59
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-24 12:50:01
34k的带你鉴定了是你蛋白吗?或者是什么大的融合标签么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-05-24 10:22:39
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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主
赞同二楼，各路神马可能都有，

[ 发自小木虫客户端 ]
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青山不断，绿水长流
3楼2014-05-24 10:35:36
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-05-24 10:22:39
34k的带你鉴定了是你蛋白吗?或者是什么大的融合标签么?

这个我要如何鉴定呢？我现在还不确定，但是它确实比对照粗
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4楼2014-05-24 12:12:17
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for5

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-27 18:58:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-05-24 12:12:17
这个我要如何鉴定呢？我现在还不确定，但是它确实比对照粗...

做个wb。很多人这时候会认为表达不完全，或者降解什么的，但是其实真实的原因都需要你仔细验证排查才能知道

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
5楼2014-05-24 13:02:09
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-24 20:39:29
楼主的蛋白比较大，降解的可能性是有的，根据蛋白所带的标签鉴定下，至于降解，可以尝试将诱导时间缩短，诱导开始时的OD值增大到1试试，祝好运
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爱拼才会赢
6楼2014-05-24 18:29:39
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wsym

新虫 (初入文坛)
我这边也遇到了相同的情况，50kd的表达在25kd左右。WB带在25kd，基因上游标签抗体。
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7楼2014-05-26 10:15:01
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wsym at 2014-05-26 10:15:01
我这边也遇到了相同的情况，50kd的表达在25kd左右。WB带在25kd，基因上游标签抗体。

那后来怎么解决的呢
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8楼2014-05-26 14:21:40
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-05-24 18:29:39
楼主的蛋白比较大，降解的可能性是有的，根据蛋白所带的标签鉴定下，至于降解，可以尝试将诱导时间缩短，诱导开始时的OD值增大到1试试，祝好运

我连接的是pet-32a载体，用的内切酶是xho1（上游） 和Ecor1（下游）.但是载体上的蛋白表达顺序是 Ecor1，xho1,。想问一下 我这样是不是弄反了，这样反方向表达与我的蛋白不出有关系吗？
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9楼2014-05-26 14:27:14
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aloha

金虫 (小有名气)
反向了，你还认为是自己的蛋白！！？ 我都吐血了
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信仰科学,文献无界
10楼2014-05-26 14:59:08
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