24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2595  |  回复: 13

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导表达的蛋白片段比目的蛋白小了一倍,怎么回事? 已有4人参与

最近在做诱导蛋白表达,预期蛋白大小78kd左右,尝试了一些温度,IPTG浓度也设了梯度,时间也有延长,在oD值在0.6-0.8时开始诱导,结果都没有诱导出来,室温诱导过夜后,在34kd处条带粗,但是与所要蛋白小了大概一半,不知是怎么回事?恳请大家帮忙分析一下原因,急啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-24 12:50:01
34k的带你鉴定了是你蛋白吗?或者是什么大的融合标签么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
操蛋的XX
2楼2014-05-24 10:22:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

赞同二楼,各路神马可能都有,

[ 发自小木虫客户端 ]
青山不断,绿水长流
3楼2014-05-24 10:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-05-24 10:22:39
34k的带你鉴定了是你蛋白吗?或者是什么大的融合标签么?

这个我要如何鉴定呢?我现在还不确定,但是它确实比对照粗
4楼2014-05-24 12:12:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

for5

木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-27 18:58:02
引用回帖:
4楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-05-24 12:12:17
这个我要如何鉴定呢?我现在还不确定,但是它确实比对照粗...

做个wb。很多人这时候会认为表达不完全,或者降解什么的,但是其实真实的原因都需要你仔细验证排查才能知道

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
操蛋的XX
5楼2014-05-24 13:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-24 20:39:29
楼主的蛋白比较大,降解的可能性是有的,根据蛋白所带的标签鉴定下,至于降解,可以尝试将诱导时间缩短,诱导开始时的OD值增大到1试试,祝好运
爱拼才会赢
6楼2014-05-24 18:29:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsym

新虫 (初入文坛)

我这边也遇到了相同的情况,50kd的表达在25kd左右。WB带在25kd,基因上游标签抗体。
7楼2014-05-26 10:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wsym at 2014-05-26 10:15:01
我这边也遇到了相同的情况,50kd的表达在25kd左右。WB带在25kd,基因上游标签抗体。

那后来怎么解决的呢
8楼2014-05-26 14:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-05-24 18:29:39
楼主的蛋白比较大,降解的可能性是有的,根据蛋白所带的标签鉴定下,至于降解,可以尝试将诱导时间缩短,诱导开始时的OD值增大到1试试,祝好运

我连接的是pet-32a载体,用的内切酶是xho1(上游) 和Ecor1(下游).但是载体上的蛋白表达顺序是 Ecor1,xho1,。想问一下 我这样是不是弄反了,这样反方向表达与我的蛋白不出有关系吗?
9楼2014-05-26 14:27:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aloha

金虫 (小有名气)

反向了,你还认为是自己的蛋白!!? 我都吐血了
信仰科学,文献无界
10楼2014-05-26 14:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张冰宝 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 一志愿中科大070300化学,314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +10 代fish 2026-04-09 10/500 2026-04-10 09:49 by potato妹
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +8 无情的小羊 2026-04-09 9/450 2026-04-10 09:30 by 松花缸1201
[考研] 0854调剂 +7 950824he@ 2026-04-09 7/350 2026-04-10 09:10 by Delta2012
[考研] 297求调剂 +27 GENJIOW 2026-04-07 30/1500 2026-04-09 23:20 by wolf97
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 267求调剂 +5 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:47 by stone_128
[考研] 生物学308分求调剂(一志愿华东师大) +13 相信必会光芒万 2026-04-06 16/800 2026-04-09 13:54 by 徐良白眉大侠
[考研] 070300化学279求调剂 +17 哈哈哈^_^ 2026-04-08 18/900 2026-04-09 10:49 by 三七七想上岸
[考研] 求助071001调剂!!! +7 黄守松 2026-04-05 8/400 2026-04-09 09:07 by 徐良白眉大侠
[考研] 求调剂 +9 月@163.com 2026-04-07 11/550 2026-04-08 14:48 by qlm5820
[考研] 336求调剂,一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 301求调剂 +18 121. 2026-04-04 18/900 2026-04-07 17:49 by 蓝云思雨
[考研] 材料求调剂 +18 一样YWY 2026-04-05 18/900 2026-04-07 15:49 by dxlg
[考研] 工科 22408 267求推荐 +4 wanwan00 2026-04-05 5/250 2026-04-06 22:47 by chenzhimin
[考研] 工科370求调剂 +3 溏心煎鸡蛋 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:55 by 这是一个无聊的
[考研] 考研调剂 +5 美丽的youth_ 2026-04-04 6/300 2026-04-06 06:57 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
信息提示
请填处理意见