| 查看: 5140 | 回复: 2 | ||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
Elisa检测样本中蛋白的含量，标曲线性范围和样本最佳稀释倍数怎么确定？ 已有2人参与
|
||
|
采用别人推荐的国外的Elisa试剂盒，本来是定性的试剂盒，只有阳性对照品，阳性对照倍比稀释后线性很好，我们就考虑用来做定量检测。该试剂盒用的是双抗体夹心法。现在遇到了以下两个问题，想请各位帮忙支支招。 1.关于标准曲线范围：阳性对照品的单位为ng/mL单位，本来含量就很少，倍比稀释了好多浓度，标曲用线性拟合，线性依然非常好，R2=0.999以上，那么我要怎么确定这个试剂盒的检测下限或定量下限（因为我的样本中本来含量可能就很微量，低浓度的检测比较有用） 2.关于样本的最佳稀释倍数：我要检测的是一种外源蛋白，不是抗体类蛋白。这种蛋白从理论上是几乎不太可能在血清中存在，但我要Elisa检测确定下这种蛋白是否进入血清。由于没有阳性血清，目前测得的血清中含量都很微量，但由于还没摸索出最佳稀释倍数，请教各位有什么好方法可以确定其最佳稀释倍数。听老师说以血清为基质加入含这种蛋白的溶液进行稀释，我还是不太懂该怎么操作，亲们有经验的多指教指教啊。那么其他样本的最佳稀释倍数又是怎么确定的呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
2026国自然函评费到账
已经有17人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有15人回复
-
2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战
已经有5人回复
-
跳槽后在研项目怎么办？
已经有10人回复
-
什么时候开奖？
已经有10人回复
-
今天放榜吗？
已经有16人回复
-
93BebMhtakh前后11位开头都是大写
已经有8人回复
-
范进中举一文的中心思想
已经有4人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有26人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有16人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问分析物质浓度时检测限（detection limit）怎样算
已经有6人回复
- 做药动时有样品浓度超过标曲范围，如何验证分析方法的稀释方法学考证，急！！！谢谢
已经有6人回复
- BSA做考马斯亮蓝标准曲线的问题
已经有14人回复
- 测牛血清白蛋白吸光值不一样？
已经有9人回复
- 求教用HPLC法测血药浓度做药时曲线，线性范围应该怎样确定？
已经有10人回复
- 含量测定，方法学试验一定要有检出限的数据吗？
已经有18人回复
- 线性范围的最低浓度为什么比检出限还低
已经有16人回复
- 硫酸苯酚法测定多糖含量中量的问题
已经有15人回复
- 在药动试验中，标准曲线及稳定性考察的几个问题
已经有16人回复
- 生物样品检测限，标曲问题
已经有3人回复
- ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？
已经有16人回复
- 样品含量必须是标曲的中间浓度点吗？
已经有9人回复
- 生物样品LC-MS-MS分析超出线性范围最高点10倍解决方案
已经有28人回复
- 【求助/交流】蛋白质含量测定问题
已经有24人回复
- 【求助】考马斯测定蛋白质含量时稀释倍数怎么定
已经有7人回复
- 【求助/交流】考马斯亮兰法（Bradford法）测定蛋白浓度事宜请教！
已经有7人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+5, BioEPI+1, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-06-07 09:10:58
youlinglyw: 金币+5, BioEPI+1, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-06-07 09:10:58
|
我来尝试回答一下楼主的问题。 第一个问题，标准曲线的范围。对于标准曲线的最低检出量，其实有至少两种方法可以确定的。第一，理论上的最低检出量，这个可以通过计算来确定，这是夹心法，将阴性对照的OD值+2SD（阴性对照OD值的标准差），计算出来的OD值代入拟合出来的标准曲线，就是理论上的最低检出限；第二，将阳性对照用阴性对照进行对倍稀释，稀释N次之后，每个稀释度做10个复孔，计算每个稀释度10个复孔OD值的精密性（CV%值），如果再第N次稀释的CV%大于15%，则第N-1次稀释时的浓度，就是最低检出限。其他的方法，我也不太清楚了，但如果是作为标准曲线的第二个点的浓度（即零浓度之后的第一个浓度点），建议可能的话，就用cutoff值（临界值）作为其浓度。 第二个问题，血样的最佳稀释度。这个要根据血样里，待测物质的浓度来决定，如果待测物质的浓度在标准曲线的浓度范围里的话，血样不用稀释都可以，如果待测物质的浓度超出了标准曲线的线性范围，则把血样稀释至线性范围内就行了。 补充一下，以血清为基质，把待测物质按一定的浓度加入到血清里，进行检测。我觉得这是测定试剂的回收率，是判断试剂准确度的标准之一，是定量试剂准确性评价的一种重要方法。 |
3楼2014-06-06 21:05:08
2楼2014-05-23 00:27:22
40