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东啸长安

铜虫 (小有名气)

[求助] 测牛血清白蛋白吸光值不一样?

我做膜对牛血清白蛋白的吸附测试,感觉值不准,于是配了5组1g/l牛血清白蛋白溶液,一段时间测测吸光值,结果发现6组相同浓度的吸光值相差很大,有的0.8,0.6,0.7!我不知道是我配的原因还是机器的原因!求解啊,望给予细致的解释!我所有的样品都是稀释十倍的,处于线性范围之内!是牛血清蛋白不稳定吗?还是怎么回事,很着急!
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东啸长安

铜虫 (小有名气)

我用的是紫外分光光度计在595nm处检测的!
2楼2013-09-21 22:28:03
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梦想与现实共舞

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2013-09-22 20:43:39
一般测的是280nm吧,1mg/ml的浓度不高了,不用稀释了。蛋白溶液不能放太久
3楼2013-09-22 09:43:39
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mapa675

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2013-09-22 20:43:49
最好是现配现用,这样比较准,时间长了,沉降,变性有可能
4楼2013-09-22 10:10:05
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东啸长安

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mapa675 at 2013-09-22 10:10:05
最好是现配现用,这样比较准,时间长了,沉降,变性有可能

我是每个小时测一次,而且不用的时候是把他们放在4摄氏度的冰箱里,是不是紫外分光光度计坏掉了
5楼2013-09-22 10:26:34
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东啸长安

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦想与现实共舞 at 2013-09-22 09:43:39
一般测的是280nm吧,1mg/ml的浓度不高了,不用稀释了。蛋白溶液不能放太久

我用的是考马斯亮蓝染色液配置的!
6楼2013-09-22 10:27:39
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长

【答案】应助回帖


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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2013-09-22 20:44:00
有几种可能造成的
1、系统误差,包括每次稀释时的准确性,所用容器是否有吸附(比如塑料制品),加入考马斯蓝的量;
2、考马斯蓝加入的时间。考马斯蓝显色时间一般不得超过半小时,所以需每次测量前再进行显色反应,但这样的操作必然带来一定的系统误差;
3、检测你的紫外的灯(氙灯或钨灯)是否还稳定。
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
7楼2013-09-22 10:51:04
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yangjingli

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mapa675 at 2013-09-22 10:10:05
最好是现配现用,这样比较准,时间长了,沉降,变性有可能

师傅,我现在也在做牛血清蛋白的紫外标准曲线,就是直接把BSA溶解在去离子水中做的。最大吸收峰在288处,可是文献上都在280出 ,这是什么原因呢?
8楼2014-06-23 16:04:11
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蔺林

新虫 (初入文坛)

学习了 谢谢
9楼2014-06-24 14:09:59
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lairena

铜虫 (初入文坛)


markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2014-06-25 22:09:38
引用回帖:
8楼: Originally posted by yangjingli at 2014-06-23 16:04:11
师傅,我现在也在做牛血清蛋白的紫外标准曲线,就是直接把BSA溶解在去离子水中做的。最大吸收峰在288处,可是文献上都在280出 ,这是什么原因呢?...

可能和产品质量有一定的关系,上次我测过一组BSA,用光谱扫描,发现峰在276-277nm这样。但做曲线还可以。
http://www.qinms.com
10楼2014-06-25 16:07:48
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