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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 测牛血清白蛋白吸光值不一样？
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东啸长安

铜虫 (小有名气)

[求助] 测牛血清白蛋白吸光值不一样？

我做膜对牛血清白蛋白的吸附测试，感觉值不准，于是配了5组1g/l牛血清白蛋白溶液，一段时间测测吸光值，结果发现6组相同浓度的吸光值相差很大，有的0.8,0.6,0.7!我不知道是我配的原因还是机器的原因！求解啊，望给予细致的解释！我所有的样品都是稀释十倍的，处于线性范围之内！是牛血清蛋白不稳定吗？还是怎么回事，很着急！
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1楼 2013-09-21 22:26:25
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东啸长安

铜虫 (小有名气)
我用的是紫外分光光度计在595nm处检测的！
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2楼2013-09-21 22:28:03
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梦想与现实共舞

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-09-22 20:43:39
一般测的是280nm吧，1mg/ml的浓度不高了，不用稀释了。蛋白溶液不能放太久
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3楼2013-09-22 09:43:39
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mapa675

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-09-22 20:43:49
最好是现配现用，这样比较准，时间长了，沉降，变性有可能
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4楼2013-09-22 10:10:05
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东啸长安

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mapa675 at 2013-09-22 10:10:05
最好是现配现用，这样比较准，时间长了，沉降，变性有可能

我是每个小时测一次，而且不用的时候是把他们放在4摄氏度的冰箱里，是不是紫外分光光度计坏掉了
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5楼2013-09-22 10:26:34
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东啸长安

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦想与现实共舞 at 2013-09-22 09:43:39
一般测的是280nm吧，1mg/ml的浓度不高了，不用稀释了。蛋白溶液不能放太久

我用的是考马斯亮蓝染色液配置的！
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6楼2013-09-22 10:27:39
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-09-22 20:44:00
有几种可能造成的
1、系统误差，包括每次稀释时的准确性，所用容器是否有吸附（比如塑料制品），加入考马斯蓝的量；
2、考马斯蓝加入的时间。考马斯蓝显色时间一般不得超过半小时，所以需每次测量前再进行显色反应，但这样的操作必然带来一定的系统误差；
3、检测你的紫外的灯（氙灯或钨灯）是否还稳定。
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能攻心则反侧自消，从古知兵非好战；不审势即宽严皆误，后来治蜀要深思
7楼2013-09-22 10:51:04
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yangjingli

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mapa675 at 2013-09-22 10:10:05
最好是现配现用，这样比较准，时间长了，沉降，变性有可能

师傅，我现在也在做牛血清蛋白的紫外标准曲线，就是直接把BSA溶解在去离子水中做的。最大吸收峰在288处，可是文献上都在280出 ，这是什么原因呢？
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8楼2014-06-23 16:04:11
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蔺林

新虫 (初入文坛)
学习了 谢谢
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9楼2014-06-24 14:09:59
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lairena

铜虫 (初入文坛)
★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2014-06-25 22:09:38
引用回帖:
8楼: Originally posted by yangjingli at 2014-06-23 16:04:11
师傅，我现在也在做牛血清蛋白的紫外标准曲线，就是直接把BSA溶解在去离子水中做的。最大吸收峰在288处，可是文献上都在280出 ，这是什么原因呢？...

可能和产品质量有一定的关系，上次我测过一组BSA，用光谱扫描，发现峰在276-277nm这样。但做曲线还可以。
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http://www.qinms.com
10楼2014-06-25 16:07:48
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