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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 材料表征测试 » 【求助】牛血清白蛋白浓度与吸光度居然成反比
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carlos486

至尊木虫 (著名写手)

大虫

[交流] 【求助】牛血清白蛋白浓度与吸光度居然成反比 已有14人参与

好郁闷，我用考马斯亮蓝法测牛血清白蛋白，做工作曲线时，发现牛血清白蛋白浓度与吸光度（A595）居然成反比，还出现负数。而且蛋白量高时，与考马斯亮蓝混合时会出现小颗粒。请问各位虫友到底是什么原因，怎么解决（染色的场合是塑料离心管）
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积极向上，清醒理智，避虚就实
1楼 2010-04-13 14:40:32
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shihang_09

金虫 (小有名气)
★
jc-wu(金币+1):谢谢参与 2010-04-13 19:50
carlos486(金币+1): 2010-04-13 19:53
蛋白含量是不是太高了？吸光度控制在1.0以内比较好吧
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复合材料研发
2楼2010-04-13 18:04:53
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jc-wu
引用回帖:
Originally posted by shihang_09 at 2010-04-13 18:04:53:
蛋白含量是不是太高了？吸光度控制在1.0以内比较好吧

[ Last edited by jc-wu on 2010-4-13 at 19:50 ]
3楼2010-04-13 18:48:26
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carlos486

至尊木虫 (著名写手)

大虫
引用回帖:
Originally posted by shihang_09 at 2010-04-13 18:04:53:
蛋白含量是不是太高了？吸光度控制在1.0以内比较好吧

不高，我已经把蛋白浓度降的很低很低了，还是出现那种现象
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积极向上，清醒理智，避虚就实
4楼2010-04-13 19:55:55
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weiyanbme

木虫 (正式写手)
carlos486(金币+1): 2010-04-13 20:12
再做一次吧，如果还是出现类似的问题，检查试剂有没有问题，另外，染液最好过滤一下
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5楼2010-04-13 20:09:10
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carlos486

至尊木虫 (著名写手)

大虫
引用回帖:
Originally posted by weiyanbme at 2010-04-13 20:09:10:
再做一次吧，如果还是出现类似的问题，检查试剂有没有问题，另外，染液最好过滤一下

我做了现在不下十遍，染液也过滤过，用了别人的试剂还是不行，出现同样的情况
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积极向上，清醒理智，避虚就实
6楼2010-04-13 20:11:17
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weiyanbme

木虫 (正式写手)
carlos486(金币+1): 2010-04-13 21:15
carlos486(金币+1): 2010-04-15 12:41
引用回帖:
Originally posted by carlos486 at 2010-04-13 20:11:17:

我做了现在不下十遍，染液也过滤过，用了别人的试剂还是不行，出现同样的情况

你检查过你的水了吗？我们实验室就出现过由于去离子水是酸性的使实验出现奇奇怪怪的现象
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7楼2010-04-13 20:17:23
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笑看滚滚红尘

木虫 (正式写手)
★ ★
jc-wu(金币+1):谢谢回帖交流 2010-04-13 21:39
way910(金币+1):谢谢参与 2010-05-04 08:54
你用考马斯亮蓝测别的物质，要是没有问题就是牛血清蛋白出问题，
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8楼2010-04-13 21:11:36
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笑看滚滚红尘

木虫 (正式写手)
carlos486(金币+1): 2010-04-15 12:41
还有楼主目测下是不是血清蛋白越多就颜色越深，如果是这样就都没有问题是你搞反了，嘿嘿我以前刚做这个的时候就搞反了！
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9楼2010-04-13 21:13:50
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shihang_09

金虫 (小有名气)
★ ★
jc-wu(金币+1):谢谢参与 2010-04-14 19:01
carlos486(金币+1): 2010-04-15 12:41
americanyk(金币+1):Thank you 2010-06-14 20:42:45
这个很奇怪哦。
测浓度时，从小往大测。
换样品时，用清水洗比色杯2遍，乙醇2遍，然后吹风机吹干。
G250-是红色么？不是就重新配，把容量瓶用无水乙醇洗干净了，不行就超声10min，肯定干净了。再不对，那就是。。悲剧了
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复合材料研发
10楼2010-04-14 18:46:13
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