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点点tina

金虫 (小有名气)

[求助] 硫酸苯酚法测定多糖含量中量的问题

我做的标准曲线是比较好的,R2在0.99以上。我做多糖的提取之后算出来的多糖的含量极其少,在0.14mg/ml以下,可是它应该的范围是在4mg/ml左右,我想知道是否是硫酸苯酚法的问题呢?还是怎样呢?
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努力分离,好好解谱
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点点tina

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by guoheizi at 2012-10-16 22:12:18
妹子 你那玩意都没溶 你测个毛线啊 呵呵?
标准液我是说你确定自己配制的浓度没问题就好。
还有多糖你水提醇沉以后除蛋白烘干的这个地方可否说的清楚一些?你的多糖可以烘干么??呵呵试问您是多少温度?

好吧 大哥,照你这么说应该是没有溶解吧。
这个我是先除的蛋白然后在醇沉得这个没问题吧,当时没有去掉氯仿正丁醇是不是有影响啊?我用的60烘干的,因为没有别的方法了,其他人很多用的冷冻干燥可是学校不让用啊 请赐教的说 谢谢哈
努力分离,好好解谱
10楼2012-10-17 11:38:31
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普通回帖

632295417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
点点tina: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-16 21:53:29
你用的是葡萄糖的标准曲线吗?你的曲线范围貌似有点大啊。你说的不是特别清楚啊。我说一下我做的吧,线性范围是10-50微克,把供试品稀释到那个范围内进行测定的。我的供试品要是你那么大的浓度的话,吸光度会很大很大。一般吸光度要求要小于1的
坚强勇敢的活着
2楼2012-10-16 10:25:48
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点点tina

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 632295417 at 2012-10-16 10:25:48
你用的是葡萄糖的标准曲线吗?你的曲线范围貌似有点大啊。你说的不是特别清楚啊。我说一下我做的吧,线性范围是10-50微克,把供试品稀释到那个范围内进行测定的。我的供试品要是你那么大的浓度的话,吸光度会很大很 ...

我用的是0.1mg/ml的多糖溶液,做出来的标准曲线是最大的0.015mg/ml吸光值是0.798.标准曲线是没有问题的。我说的数据是稀释后的,应该是稀释一百倍之后到0.70左右,可是我提取出来的是十倍之后0.7。所以我才想说是不是硫酸苯酚法有些测量不出来呢?
不好意思,这个实在是觉得数据太不靠谱了 谢谢
努力分离,好好解谱
3楼2012-10-16 12:26:24
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632295417

木虫 (正式写手)

0.1mg/ml的多糖溶液是纯品,标准品吗??你的意思是,标准品稀释100倍是0.7,你提的是稀释10倍0.7?我个人认为这个方法应该是没有问题的,不知道你是哪步计算错了,还是什么的。
坚强勇敢的活着
4楼2012-10-16 13:54:35
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szq215216

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
方法肯定木有问题,药典都有。你为什么说它的范围应该在4mg/ml左右呢,用的什么方法?是硫酸苯酚法吗?
5楼2012-10-16 17:40:17
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点点tina

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by szq215216 at 2012-10-16 17:40:17
方法肯定木有问题,药典都有。你为什么说它的范围应该在4mg/ml左右呢,用的什么方法?是硫酸苯酚法吗?

就是我提取出来之后的问题,我用的水提醇沉法,用乙醇沉淀后除蛋白、烘干得到的多糖,称取了1.2g定容到了250ml,应该不会太小的啊。到底是为什么呢?是水提醇沉得问题吗难道,求指点 谢谢
努力分离,好好解谱
6楼2012-10-16 20:53:39
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guoheizi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢! 2012-10-16 23:19:47
我现在在做多糖 r2 两个9 其实不计较的话也可以的。问题的关键是你( 称取了1.2g定容到了250m )这个多糖全溶解了么?多糖是大分子溶解性实际上是比较差的某些情况下。还有你是要测定你除完蛋白以后这个物质里面的含糖量么?你的标准品溶液的浓度你确定好了昂?呵呵 我用过这个方法测定糖含量 方法学上肯定没问题。
7楼2012-10-16 21:27:27
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点点tina

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by guoheizi at 2012-10-16 21:27:27
我现在在做多糖 r2 两个9 其实不计较的话也可以的。问题的关键是你( 称取了1.2g定容到了250m )这个多糖全溶解了么?多糖是大分子溶解性实际上是比较差的某些情况下。还有你是要测定你除完蛋白以后这个物质里面的含 ...

首先是否溶解这个问题应该是不大能溶解吧,可是我是稀释之后测定的,就是又把它稀释了10、20、100测定的可是数值还是很小,当然有可能那个刚开始就没有完全溶解这个有可能。
其次我是想测定除掉蛋白质后、醇沉后的多糖的含量。
您所说的标准也是什么意思,我的是0.002--0.015好几个梯度过去的做的标准曲线,我看过别人的文章应该是没有问题的。谢谢你的答案 希望可以在说明一下你觉得可能的原因谢谢
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8楼2012-10-16 21:57:45
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guoheizi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


点点tina: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2012-10-17 11:38:39
妹子 你那玩意都没溶 你测个毛线啊 呵呵?
标准液我是说你确定自己配制的浓度没问题就好。
还有多糖你水提醇沉以后除蛋白烘干的这个地方可否说的清楚一些?你的多糖可以烘干么??呵呵试问您是多少温度?
9楼2012-10-16 22:12:18
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