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[交流]
硫酸咔唑法与硫酸苯酚法的区别？
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请教各位虫友，硫酸咔唑法和硫酸苯酚法在测多糖含量时的原理和计算方式有什么区别啊？ 1.看文献和资料有的说硫酸咔唑法测的是多糖中酸性成分的含量，而硫酸苯酚法测的是总糖的含量，这两种方法反映在原理上到底有什么区别呢？ 2.是不是酸性糖在硫酸作用下水解成单糖，然后再分解成含有-COOH基团的糠醛，此糠醛能与咔唑反应生成紫红色的化合物而显色，那么其余不含-COOH的糖部分，尽管最后也生成了糠醛，但是这个糠醛基团上因为没有-COOH而无法与咔唑反应显色呢？ 3.那么硫酸苯酚法之所以能测总糖的含量，是不是因为不管酸性中性的多糖它们水解成单糖后最后都分解成糠醛，不论这个糠醛上带什么样的基团都能跟苯酚发生酚醛缩合反应生成橙黄色化合物而在~490nm有吸收呢？ 4.对于硫酸咔唑法所测酸性多糖的含量，我对于文献的表述理解不是很清晰，请问是指酸性多糖整体的含量还是仅仅是指酸性多糖中糖醛酸部分的含量呢？比如下面这个多糖（结构见下图）以葡萄糖醛酸作标准曲线，然后按照硫酸咔唑法的步骤测得这个多糖的吸光度A，通过曲线方程Y=aX+b，算出来的含量直接就是这个多糖的含量还是仅仅是这个多糖中葡萄糖醛酸的含量呢？求教！ 5.还有个问题就是看有的文献提到过在计算糖含量的时候，通过标曲得到的结果好像并不是真实的结果，因为所用葡萄糖或者葡萄糖醛酸当标准品做标曲反映出来的结果跟纯的多糖当标准品是不一样的，真实的结果应该再这个的基础上乘与一个换算系数，而这个换算系数通常是用纯的多糖（或者已知纯度的多糖）通过实验的测得的，那除了实验测得的话，请问大家能不能通过多糖的化学结构分析其单糖组成及其比例然后理论计算出其换算系数呢？可能不是很精确，但能否粗略得出呢？ 真诚求教大家，希望可以互相交流，共同进步！  |
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楼主这个问题很好，也很有深度。本人目前也在纠结这个问题，衡量一个多糖的丰富到底是用糖醛酸还是用苯酚硫酸法测定的总糖来表示 发自小木虫Android客户端 |
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2012-07-14 10:46
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