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极品男人

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 硫酸——苯酚法测多糖浓度

求助!!! 本人最近在做硫酸--苯酚法测多糖浓度,用葡萄糖绘制标准曲线。苯酚用的是分析纯的,可绘制出来的曲线那个歪啊。。。不知哪位大神做过这个实验,求指点啊
求助  硫酸——苯酚法测多糖浓度
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丑女贝蒂

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
   . 5%苯酚溶液:取适量苯酚(A.R),高温蒸馏,收集180℃馏分,称取50.0g,用水溶解,最后定容于1000m1棕色容量瓶中,冷藏避光保存。
   . 葡萄糖标准液(200mg/L),精称110℃恒重的葡萄糖20.0mg,用水溶解,定容至100m1。精密吸取2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 ml分别置于100ml量瓶中加水定容至刻度,摇匀得葡萄糖稀释液。
   . 标准曲线的制备:分别精密量取上述各稀释液2 ml置具塞试管中,同时精密量取水2.0 ml置另一具塞试管中,各管分别加5%苯酚溶液(新制)1 ml,摇匀,然后迅速加入浓硫酸5.0ml,立即摇匀,于40℃水浴中保温30min,取出,置冷水浴中5 min。以上述2.0ml水所制得的空白溶液做参比,于490nm波长处测定各溶液吸收度,以葡萄糖稀释液的浓度(μg/ml)为横坐标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线。
   . 样品的测定:吸取已定容的水解样(必要时可稀释到一定体积)2.0ml置于25ml比色管中,加5%苯酚试剂1.0ml,迅速滴加5.0ml浓硫酸,摇匀后在室温下静置30min;每个样品做三个平行样。于490nm处用空白调零测吸光度,然后代入标准曲线算出其总糖含量。
实验、、、
2楼2013-05-20 16:17:45
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丑女贝蒂

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, thanks for sharing the experience 2013-05-21 17:48:23
第三步的40℃水浴中保温30min在常温下静置30min就行,测标准曲线需要测好几遍才能准,加油吧!
实验、、、
3楼2013-05-20 16:19:55
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极品男人

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 丑女贝蒂 at 2013-05-20 16:19:55
第三步的40℃水浴中保温30min在常温下静置30min就行,测标准曲线需要测好几遍才能准,加油吧!

谢谢你的帮助哈
4楼2013-05-21 08:30:45
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